| 研究課題/領域番号 |
20K17544
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| 研究機関 | 日本医科大学 |
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研究代表者 |
服部 裕次郎 日本医科大学, 医学部, 講師 (40528436)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | プロラクチン産生下垂体腺腫 |
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| 研究実績の概要 |
本研究ではプロラクチン産生下垂体腺腫（PRLoma）の発生に関する特異的な遺伝子の解明を行い、腫瘍発生メカニズムの解明ならびに新規薬剤治療法の開発の基礎となす知見を得ることを目的としている。そのためには研究試料として、ヒトPRLomaの検体ならびに、対照群としてヒト正常下垂体が必要である。ただし、PRLomaに対する第一選択はドパミン作動薬による薬物療法であり、手術に至る症例は少ないため検体入手は容易ではない。また、正常下垂体に関しては、正常下垂体より深部に発生した腫瘍に対してアプローチするためにやむなく正常下垂体を半分のみ切除（これによる機能低下は認めないとされる）せざるを得なかった症例に限るため、同じく検体入手は容易ではない。しかしながら、申請者の2017-2019年度の科研費課題（課題番号17K16171）の過程で数例はすでに入手していたため、2020年度に新規入手できた検体と合わせ、これまでにPRLoma群、正常下垂体群とも3例以上に達したため、次世代シーケンサーによる遺伝子の網羅的解析を試みた。その結果として、PRLoma群で有意に発現上昇している遺伝子を約1000個ほど確認した。更に絞り込みを行うべく、IPA(Ingenuity Pathway Analysis)解析を行い、複数の候補遺伝子に絞った。また、今回次世代シーケンサー解析にかけず一部保存した残存Total RNAに対して逆転写反応を行い、cDNAを作成、候補遺伝子に対する特異的プライマー・プローブを設計し、デジタルPCR法による遺伝子定量を行い、発現を確認した。
なお候補遺伝子はラットに相同性があり、ラットPRLoma腫瘍細胞株が今後の実験に使えると考えられた。現在、細胞株実験の条件検討を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
2年目（令和3年度）は候補遺伝子の絞り込みを行いその後の実験を行う予定であったが、ラットPRLoma細胞株実験で、細胞が分泌するPRLの測定に際し、測定可能な試薬キットと、測定できないキットが存在していたことが判明し、令和3年度後半はその条件検討を行う必要が生じたため、予定よりやや遅れていると考える。
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| 今後の研究の推進方策 |
次世代シーケンサー解析によりプロラクチン産生下垂体腺腫（PRLoma）に特徴的な遺伝子の候補を絞ったため、ラットPRLoma細胞株を用いてその遺伝子ならびに受容体の発現確認を行い、強制発現時（もしくは薬剤投与時）に細胞増殖能やPRL分泌能にどのような変化をきたすかを調べる。時間に余裕があれば動物実験も考慮する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
2021年度も新型コロナウイルス感染症のため、試薬の入荷が滞ったこと、学会がほとんどWEB開催となり旅費の必要がなくなったことなどにより、予定していた金額を使う状況には至らなかった。
今後の使用計画としては、細胞培養に関する物品購入、結果をまとめるための解析ソフト購入、などの使用を検討している。
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