| 研究課題/領域番号 |
20K17628
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| 研究機関 | 和歌山県立医科大学 |
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研究代表者 |
岩本 博光 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (60756592)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | iPSDCs / ネオアンチゲン / 癌ワクチン |
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| 研究実績の概要 |
摘出した患者の癌組織を約2mm角に細切し、DMEM/F12 (Thermo Fisher) 10mL に Liberase DH (Roche Diagnostics) 100μL (0.26 U/ mL)を添加した酵素液中で、37℃で2時間インキュベートする。これらのポアサイズ 500μmおよび250μmの金属メッシュを通過した分画を回収。これを100μmのナイロンメッシュ、40μmのナイロンメッシュの 順に通して、各フィルター上に残った小腫瘍片を8ng/mL bFGF を添加したStemPro® hESC培地(ともにThermoFisher)中で翌 日まで培養し、CTOSを形成させる。そして麻酔下でNOD/SCIDマウスの皮下にCTOSを接種して移植する。
継代及び実験に使用する場合は腫瘍塊の直径が約10mmになったところでマウスを頚椎脱臼し腫瘍塊を取り出す。組織像については腫瘍塊のパラフィン切片をH&E染色で確認する予定であった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
摘出した患者の癌組織移植したCTOSを形成に成功した。またこれを麻酔下でNOD/SCIDマウスの皮下にCTOSを接種して移植し、継代培養することにも成功した。
その一方でコロナ感染症の影響もあり、適切な症例を十分確保できておらず、一部の作業が遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
Winn assayによるin vivoでの抗腫瘍効果の比較検討
iPSDCs-neoantigen、iPSDCs-GFP（コントロール）をstimulator、患者由来PBMCsをresponderとして供培養を行い、in vitro刺激を3回繰り返すことによりbulk CTLsを得る。次にMACS Proを用いてCD8+CTLsをソートし、癌細胞株1に対しCD8+CTLsが10の割合で混ぜ合わせ、100µLにつき標的癌細胞株1×10＊５cellsとCD8+CTLsが1×10＊６cellsになるようにPBSにて調整する。CTOS NOD/SCID miceの背中に皮下投与する。そして腫瘍のサイズを(short diameter)＊２× long diameter × 0.52を指標とし経時的に評価し、その値が2000を超えた場合はマウスの苦痛を考慮し安楽処置とする。すべてのマウスを解剖し腹膜播種、肝転移、脾臓転移などの転移の有無を確認し、ある場合はその数、大きさを記録する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
コロナ感染症の影響により一部の研究予定がずれ込んでいるため予算も一部残った。
本年度はその分も研究を進めるため、繰り越しとした。
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