| 研究課題/領域番号 |
20K18318
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| 研究機関 | 琉球大学 |
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研究代表者 |
上原 貴行 琉球大学, 医学部, 委託非常勤講師 (00644402)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | HPV関連頭頸部癌 / mTOR / Raptor |
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| 研究実績の概要 |
HPV関連頭頸部癌に関する我々の過去のin vitro研究では、細胞増殖シグナルの一つであるPI3K/Akt/mTOR経路に関連して、mTOR阻害剤の効果がHPV非関連癌より関連癌で有意に高く、かつmTORの腫瘍促進効果において重要なmTORC1の構成因子としてしられているRaptorの発現が亢進していることを同定した。これを踏まえて、我々はmTORおよびRaptorを標的として関連した細胞内シグナル伝達経路の解析と、併せて阻害剤やRaptorに対する直接の遺伝子ノックダウンの手法を用いることで特異的なシグナル伝達系の解析および将来的に新規の分子標的治療の開発を目的として研究を計画した。
研究方法の計画・進捗：HPV関連頭頸部癌におけるｍTOR/Raptorに関連した細胞内シグナル伝達系の解析として、先行研究からRaptorが高発現しているHPV16感染頭頸部癌細胞株UMSCC047と子宮頸癌細株Caski細胞にmTOR阻害剤(temsirolimus等)およびRaptorに対するsiRNAを用いノックダウンを行い、mTORの下流シグナルの解析をWestern blottingアッセイにて解析し、併せて細胞増殖やアポトーシスに関する解析を行う予定である。また細胞株にて免疫染色でRaptorやmTORの細胞内局在の解析を行い、併せて当科で所有している頭頸部癌組織検体で、同様の免疫染色での解析を行うことを予定している。現在、RaptorのsiRNAとLipofectamineなどの試薬購入を行い、実験準備を整えているところである。また上記研究の進捗に応じて、mTOR阻害剤およびRaptorのsiRNAに併せてCisplatinおよびEGFR阻害剤を併用し、細胞株における細胞増殖およびアポトーシスに関する影響の有無を解析することで抗腫瘍効果について検討する予定としている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
COVID-19流行に伴う研究業務の制約などがあり進捗にやや遅れがある。基本的な実験機器・試薬の整備を行っている。mTOR阻害剤およびRaptor SiRNAなどの主要な試薬は既に準備済であり、また使用する細胞株や組織検体については、先行研究において学内の倫理審査での承認を得ているため実施については速やかに開始可能である。
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| 今後の研究の推進方策 |
今年度は上記計画の初年度のあたるため、今後2年程度の期間で研究データを蓄積し解析を進める予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
予算額の大半は物品費を中心に使用したが上記額については残額が生じた。4年計画の初年度のため次年度に繰り越しを行い、実験に関連する阻害剤試薬の購入などにあてて使用する予定である。
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