| 研究課題/領域番号 |
20K18390
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| 研究機関 | 和歌山県立医科大学 |
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研究代表者 |
鈴木 映美 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (60794394)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 角膜 / 創傷治癒 / ルミカン / 繊維芽細胞 |
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| 研究実績の概要 |
研究者自身がおこなった過去の研究結果である、１）角膜全層切開の角膜創傷治癒モデルにおいて創作成後5日目のみであるが、創断端距離の評価からルミカン遺伝子欠失角膜では野生型マウス角膜と比較し、角膜実質の癒合治癒が遅延していた、２）免疫組織化学検索ではルミカンノックアウトマウスで筋線維芽細胞の出現が抑制されており、治癒過程3日後でのreal-time RT-PCR法よりαSMA mRNA発現がルミカンノックアウト角膜で抑制されていたという結果を裏付けるための背景メカニズムの解明の為のin vitro研究を行った。
所属の既報(Okada Y, et al. Am J Pathol, 2011)に従ってルミカン欠損および野生型マウスの生後1日の眼球由来からoutgrowthで得た培養角膜実質細胞を、60mmシャーレでコンフルエントになるまで培養後、TGFβ1(1 ng/ml)添加時の線維化関連遺伝子発現とαSMA発現をreal-time RT-PCRを用いて評価した。
TGFβ1非添加群では野生型マウスの培養角膜細胞とルミカンノックアウトマウス培養角膜細胞でのαSMA、コラーゲンIa1の発現量に有意差はなかったが、TGFβ1添加群ではルミカンノックアウト培養角膜細胞においてαSMA、コラーゲンIa1の発現量は有意に少なかった。MCP1、VEGF、IL6の発現量はTGFβ1添加の有無にかかわらずルミカンノックアウトマウス培養角膜細胞で有意に多かった。IL-6の発現量は共に野生型マウスの培養角膜細胞とルミカンノックアウトマウス培養角膜細胞のTGFα1添加群で有意に促進された。
上記より、ルミカンは角膜実質切開創の治癒に促進的に関与している可能性を想定した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
ルミカンノックアウトマウスは1回あたりの出産で生まれる仔の数が少なく、必要な数のマウスを確保するのが困難であるため。
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| 今後の研究の推進方策 |
培養角膜実質細胞にTGFβ1添加後、経時的にシグナル伝達(Smad2/3, p38, Erk, JNK, Erk)のリン酸化をWestern blot法で検討する。
また、細胞収縮アッセイキットを用いてキットのコラーゲンゲルんに培養眼線維芽細胞を混合し、野生型マウスとルミカンノックアウトにおけるゲルの収縮率を比較検討することを通して創傷治癒とルミカンの関係性についてさらなる検討を加える。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
マウスや試薬等の購入数が予定より少なかったため次年度使用額が生じた。
新型コロナウイルス感染拡大防止のため学会がオンライン開催になり、旅費が発生しなかった。今後の使用計画として、コラーゲンキットの購入、新規の試薬やマウスの購入に使用する予定である。
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