| 研究課題/領域番号 |
20K18467
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| 研究機関 | 日本大学 |
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研究代表者 |
菊田 純 日本大学, 松戸歯学部, 専修医 (10759632)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 矯正治療 / 歯根吸収 / Hedgehogシグナル / Notchシグナル / Wntシグナル / TGF-βシグナル |
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| 研究実績の概要 |
矯正治療による歯根吸収の発生には歯根膜における炎症性サイトカインの発現が関与しており、過去の研究からNotch、Wnt、TGF-βシグナル伝達がそれらのサイトカインの発現を制御していることが明らかになっている。また、近年の研究でHedgehogシグナルが多細胞生物の発生現象において重要な役割を演じており, 骨芽細胞や軟骨細胞の分化を制御し, 骨形成に深く関与していることが報告されており、Hedgehogシグナルの一つであるSonic Hedgehog (SHH) が顎骨における破骨細胞形成を促進させることが示唆されている。このことより、矯正学的歯の移動時に生じる歯根吸収の発生にはNotch、Wnt、TGF-βシグナル伝達のみならず、Hedgehogシグナル伝達が関与している可能性が考えられる。そこで本研究では、歯根膜細胞と破歯前駆細胞におけるシグナル伝達経路間のクロストークに焦点を当て、矯正治療における歯根吸収メカニズムについて検討した。
In vivoにおいて、ラットの臼歯を50gの矯正力にて牽引し、当該部の切片は免疫組織科学染色を行った。In vitroでは、ヒト歯根膜細胞（hPDL cells）に至適矯正力モデルとして1.0g/cm2、強い矯正力モデルとして4.0g/cm2の荷重 (compression forces : CF)を作用させ、CF群とし、遺伝子・タンパク発現量を検討した。
In vivoでは矯正力を加えたラットの圧迫側歯根膜にはJagged1、Wnt5a、TGF-β1、SHH、RANKL、IL-6陽性細胞の増加が認められた。In vitroではhPDL cellsにおいて、CF4g群ではJagged1、Wnt5a、TGF-β1、SHH、RANKL、IL-6のmRNAの遺伝子・タンパク発現の増加が認められた。このことから、矯正学的歯の移動時における歯根吸収にHedgehogシグナル伝達が関与していることが示唆され、Notchシグナル伝達、Wntシグナル伝達、TGF-βシグナル伝達が相互に関与している可能性が考えられる。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
令和4年度の計画では、in vitroでヒト歯根膜細胞を用いた圧迫側モデルにて、歯根膜細胞（PDL cells）におけるNotchシグナル関連遺伝子、Wntシグナル関連遺伝子、TGF-βシグナル関連遺伝、Hedgehogシグナル関連遺伝子及びタンパクの発現を検討すること、それぞれのシグナル伝達の阻害剤を培地に添加し、歯根吸収阻害実験を行う予定であった。圧迫側モデルにおいて、強い矯正力を負荷した際に炎症性サイトカインが生じることを確認し、Notchシグナル関連遺伝子、Wntシグナル関連遺伝子、TGF-βシグナル関連遺伝子、及びHedgehogシグナル関連遺伝子、タンパク発現量の発現を検討し、Notchシグナル関連遺伝子、Wntシグナル関連遺伝子の阻害実験をすることまではできた。しかし、予定していたTGF-βシグナル、Hedgehogシグナル伝達阻害実験までは達成できなかった。
また、in vivoでは遺伝子knock outマウスを用いた実験的歯根吸収モデルにて歯根膜細胞（PDL cells）における各シグナル伝達関連遺伝子を検討する予定であったが達成できなかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和5年度では令和4年度に遂行できなかったin vivoでの遺伝子knock outマウスを用いた実験的歯根吸収モデルにて歯根膜細胞（PDL cells）における各シグナル伝達関連遺伝子を検討する。
次にin vitroでは、ヒト歯根膜細胞（hPDL cells）における圧迫側モデルを用い、TGF-βシグナル、Hedgehogシグナル遺伝子の阻害剤を添加し、各シグナル経路間のクロストークを検討する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
遂行できなかったin vivoでの遺伝子knock outマウスを用いた実験的歯根吸収モデルのためのマウス購入の費用、及び各シグナル伝達関連サイトカインの抗体購
入に使用する。
in vitroでは、ヒト歯根膜細胞（hPDL cells）における圧迫側モデルのための各シグナル遺伝子の阻害剤の購入、各シグナルのタンパク発現を検討するためのELISA kit購入に使用する。
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