| 研究課題/領域番号 |
20K20479
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
森 亮一 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 准教授 (30509310)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 炎症 / ミトコンドリア / 脂肪肝 / 非コード RNA |
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| 研究実績の概要 |
本年度は、全身性 microRNA-142（miR-142）KO マウス、肝細胞特異的 miR-142 KO マウス及びマクロファージ（クッパー細胞）特異的 miR-142 に高脂肪食餌を与え、脂肪肝発症の様態、ミトコンドリア形態観察及びミトコンドリア形態に関与する遺伝子発現の解析を行った。一方、miR-142 発現抑制効果を有する化合物スクリーニングに着手した。そして下記成果を得た。
（１）各種マウスに長期間高脂肪食餌を与えた際の脂肪肝発症様態の変化を形態学的に解析するため、現在モデルマウス作製中である。
（２）ミトコンドリアの融合・分裂に関与する遺伝子発現の差異を検証するため、次世代シーケンスデータ、ミトコンドリアデータベース及び定量 PCR を行った。その結果、幾つかの遺伝子については発現差異が認められた。
（３）想定される miR-142 転写因子結合領域（2000 bp）挿入したルシフェラーゼ活性測定用ベクター構築を行った。現在は、ヒト単球系白血病細胞株を中心として、miR-142 発現細胞株のスクリーニングを実施している。試験的にヒト単球系白血病細胞株 THP-1 に、作製した上記ベクターをトランスフェクションし死細胞判定を行った。その結果、トランスフェクションによる細胞死は認められなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度は、昨年度得たデータ詳細に検証し新た分子レベルの機能を見出すことを目的としてミトコンドリア機能解析を行った。さらに、miR-142 発現抑制に資する化合物スクリーニングにも着手することができ、トランスレーショナルリサーチの現実化に一歩近づけた。
現在のコロナ禍で試薬（血清など）や消耗品の納入遅延問題が解消されない部分があるが、全体の研究進捗状況としては、最新技術を積極的に導入することもできているため「おおむね順調に進展している」と判断した。
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| 今後の研究の推進方策 |
引き続き、全身性 miR-142 KO マウス及び miR-142 コンディショナル KO マウスを用いて解析を行う。特にシングルセル解析などの最新の遺伝子発現解析技術を導入し、バルク解析から得ていた遺伝子発現情報を、シングルセルレベルで得て、更に詳細に解析を行いたい。
一方、化合物スクリーニングを行い、miR-142 発現抑制効果を有する化合物同定のみならず、このスクリーニング技術を一般化し、迅速に他の遺伝子にも応用できるように実験系を確立する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
一部試薬類の納入が今年度中に間に合わず、さらに人件費の一部が来年度に持ち越されたため。R4 年度には試薬類は納入される予定なので、その際の支払いに用いる。
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