| 研究課題/領域番号 |
20K21526
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
榎本 秀樹 神戸大学, 医学研究科, 教授 (00360511)
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| 研究期間 (年度) |
2020-07-30 – 2023-03-31
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| キーワード | 幹細胞 / 自己組織化 / 組織再生 / RET / Sox10 / ヒルシュスプルング病 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、先天疾患を誘導する病的幹細胞は、その原因遺伝子修復により自律的組織形成能を再獲得できるかをマウスをモデルに検証することを目的とする。疾患としては先天性の腸管神経幹細胞の異常により広範に神経欠損を起こす難治性ヒルシュスプルング病（HSCR）に焦点をあてる。このモデルマウスで一部の神経幹細胞の正常化を行い、修復神経幹細胞により腸管神経系が正常に形成されるかを解明する。
初年度は、難治性HSCRモデルマウス２系統の作製に着手した。系統１では、loxP配列に挟まれた優性阻害型RETcDNAとそれに続くmCherry cDNAから構成される遺伝子カセットをマウスRet遺伝子座に挿入した。このヘテロマウスは、腸間神経系欠損のフェノタイプを呈することを確認した。系統2では、Sox10-2A-EGFP cDNAをloxPlox22272で挟み、逆向きにSox10遺伝子座に挿入するカセットを作製した。このベクターを用いて、ES細胞においてgene targetingを行い、相同組換えESクローンを得た。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
初年度は研究遂行に必須の遺伝子改変マウス作製を行った。目的2系統のうち、1系統は作製を完了し、フェノタイプ解析を始めている状況である。もう１系統も相同組換えES細胞が得られており、今秋までには目的のマウスが得られると期待される。
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| 今後の研究の推進方策 |
難治性HSCRモデルマウスにおいて、腸管神経発生のさまざまな段階で病態誘導遺伝子の修復を行い、腸管神経欠損のフェノタイプの改善がどこまで起こるかを解析していく。Phox2B-CreERT2マウスおよびPLP２-CreERT2を用い、それぞれ迷走神経堤およびシュワン細胞由来の腸管神経幹細胞における病態誘導遺伝子修復を行う。
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