| 研究課題/領域番号 |
20K22712
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| 研究機関 | 横浜市立大学 |
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研究代表者 |
高倉 大輔 横浜市立大学, 生命医科学研究科, 特任教員 (90760231)
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| 研究期間 (年度) |
2020-09-11 – 2023-03-31
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| キーワード | O-グライコプロテオミクス / 大腸がん / 糖鎖 |
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| 研究実績の概要 |
がん細胞では糖鎖の特異的付加や構造変化（不均一性変化）が生じており，この現象は，細胞極性の喪失をはじめ，がんの発生に直接関与すると指摘されている．糖鎖にはN-型とO-型がある．これまで，微量組織検体上のO-型糖鎖の解析は極めて困難であり，がん特異的O-型糖鎖の探索は容易ではなかった．本研究では、大腸がん組織検体における “O-型糖ペプチド抗原”を同定し、抗悪性腫瘍治療薬としての抗体薬品の標的分子候補や病理診断マーカー候補を提供することを目指している。昨年度までに、大腸がん凍結組織検体“腫瘍部－非腫瘍部間”における糖鎖プロファイルの違いをレクチンマイクロアレイを用いて解析し、一部のO-型糖鎖認識レクチンのシグナル強度が腫瘍部で増加していることが明らかにした。また、このO-型糖鎖認識レクチンに反応する糖タンパク質を捕集した後、糖ペプチドを濃縮し、O-グライコプロテオミクスによりO-型糖ペプチドを網羅的に同定した。本年度は、同定されたO-型糖ペプチド/タンパク質について、腫瘍部と非腫瘍部間での比較および公的データベース等を用いながら創薬候補分子の絞り込み選出を実施した。腫瘍部で特徴的な89のO-型糖タンパク質についてGO解析や膜貫通領域予測を行い、23の膜関連O-型糖タンパク質まで絞り込むことに成功した。その中から、「レセプター」「プロテオグリカン」「エンドサイトーシス」等の機能キーワードを持つCRC-T1～T6の6分子について、大腸がん病理診断マーカー/治療標的候補分子として同定した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
レクチン捕集タンパク質より、O-型糖タンパク質の網羅解析を実施し、腫瘍部と非腫瘍部間での比較および公的データベース等を用いながら、CRCT1～T6の病理診断マーカー/創薬候補分子の絞り込み選出については予定通り完了した。しかし、大腸がん組織切片を用いた糖タンパク質CRCT1～T6抗体とプローブレクチンとの２重染色については、抗体入手や染色条件の最適化に時間を要し、O-糖鎖変化と細胞極性喪失との関連性を明らかにすることが出来なかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
市販の大腸がん組織切片や分化度の異なる大腸がん株を用いた免疫組織染色を実施し、病理診断マーカーや創薬標的分子としての妥当性を検証する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
新型コロナウイルス感染症の世界的な流行により、購入予定であった海外からの取り寄せ試薬・消耗品の欠品・遅延が重なった。また、参加予定であった学会・セミナー等が全てオンライン開催となったため、旅費の計上が抑えられた。次年度も引き続き学会・セミナー等はオンライン開催が見込まれるため、経費は試薬・消耗品を中心に使用する予定である。
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