| 研究課題/領域番号 |
20K22857
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| 研究機関 | 東京理科大学 |
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研究代表者 |
重廣 司 東京理科大学, 研究推進機構生命医科学研究所, 助教 (30876058)
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| 研究期間 (年度) |
2020-09-11 – 2022-03-31
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| キーワード | T細胞免疫療法 / 人工白血球幹細胞 / がん免疫療法 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、種々の白血球への多分化能と自己複製能を有する人工白血球幹（induced Leukocyte stem; iLS)細胞を用いることによって、T細胞受容体（TCR)もしくはキメラ抗原受容体（CAR)を遺伝子導入したがん免疫治療用T細胞を大量に作製する事を目的とした。iLS細胞は造血幹前駆細胞（HSPC）に、ID3を強制発現させ、B細胞への分化に必須の転写因子であるE2Aの機能を抑制させつつ、B細胞分化条件下で培養することによって、作製および維持される。本研究では、分化と自己複製を自在に制御するために、ID3と改変タモキシフェン受容体ERT2を融合させたID3-ERT2を導入するiLS細胞の作製を試みた。ウイルスベクター、プロモーターなどの種類を検討し、ヒト臍帯血由来のHSPCへのID3-ERT2の効率的な導入方法を明らかにした。また、iLS細胞へ導入するNY-ESO-1またオバアルブミン特異的TCRおよびCD19特異的CARのプラスミドの構築を行なった。これらのTCRおよびCAR遺伝子をレトロウイルスによって、マウスiLS細胞への導入を試み、TCR/CAR遺伝子導入iLS細胞を安定に増幅することに成功した。さらに、これらのiLS細胞に対して、T細胞への分化誘導を試み、CD8陽性T細胞を産生することに成功した。そして、このCD8陽性T細胞は抗原特異的に細胞障害性サイトカインを産生することを確認した。加えて、産生されたCD8陽性T細胞は生体内での滞留性が優れるセントラルメモリーT細胞であることが確認された。これらのことから作製したiLS細胞由来T細胞は高い抗がん活性を示すことが期待される。今後、このiLS細胞由来T細胞の抗がん活性をin vitroおよびin vivoにおいて詳細に解析することによって、iLS細胞を用いた新たなT細胞移植がん免疫療法の構築を目指す。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究は、iLS 細胞からがん免疫治療用のTCR/CAR遺伝子改変T細胞の作製を目指した。まず、ヒトHSPCにID3-ERT2を効率的に導入する方法を検討した。ウイルスベクター、プロモーター、また、導入時期を詳細に検討した結果、効率的にID3-ERT2を導入する方法を確立した。また、NY-ESO-1またオバアルブミンを標的するTCRおよびCD19標的CARを遺伝子導入するためにプラスミドを構築しウイルスを作製した。そして、これらの遺伝子をヒトiLS細胞へ導入することに成功している。現在、このTCR/CAR遺伝子改変iLS細胞を安定に培養する方法を検討している。一方、TCRおよびCARを遺伝子導入したマウスiLS細胞は、すでに、安定に培養することに成功している。このマウスiLS細胞に対して、T細胞への分化誘導を試み、CD8陽性T細胞へ誘導することに成功した。そして、このiLS細胞由来CD8陽性T細胞は生体内での滞留性に優れるセントラルメモリーT細胞であり、抗原特異的に細胞障害性サイトカインを放出することをが認められた。これらのことから、iLS細胞から抗がん活性に優れるTCR/CAR遺伝子改変T細胞を作製できることが示唆された。
ヒトiLS細胞からTCR/CAR遺伝子改変T細胞を作製する準備は順調に進んでおり、マウスiLS細胞からは抗原特異的なTCR/CAR遺伝子改変T細胞を作製できていることから、本研究はおおむね順調に進展していると判断できる。
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| 今後の研究の推進方策 |
2020年度はTCRおよびCAR遺伝子を安定導入したマウスiLS細胞からCD8陽性T細胞を作製することに成功した。さらに、作製したCD8陽性T細胞は抗原特異的に活性化することを明らかにしている。2021年度は、これらiLS細胞由来CD8陽性T細胞の抗がん活性をin vitroおよびin vivoにおいて検証し、iLS細胞から作製するがん免疫治療用T細胞の有用性を明らかにする。そして、マウスiLS細胞から得られた知見を用いて、ヒトiLS細胞に対してNY-ESO-1特異的TCRもしくはCD19特異的CARを遺伝子導入し、安定に培養する方法の確立を目指す。さらに、TCR/CAR遺伝子導入iLS細胞のT細胞分化誘導を試み、作製したT細胞の機能解析を実施する。これらによって、iLS細胞を用いた新たな遺伝子改変T細胞がん免疫療法の構築を目指す。
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