| 研究課題/領域番号 |
20K22932
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
澤城 大悟 自治医科大学, 医学部, 講師 (40456132)
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| 研究期間 (年度) |
2020-09-11 – 2024-03-31
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| キーワード | 平滑筋ミオシン重鎖 / 大動脈平滑筋 / 細胞老化 |
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| 研究実績の概要 |
Myh11変異マウスのフェノタイプ解析を目的として平滑筋ミオシンの遺伝子変異（Exon29 del1263K）による家族性大動脈瘤/解離家系を報告し、改良Crispr-Cas9系で同一変異をB57BL/6マウスに導入した。
本研究ではまず、変異マウスと野生型マウスの表現型を比較検討を行った。Myh11ミオシンヘテロ変異マウスでは、ヘテロおよびホモマウスではフェニレフリン(Phe)に対する大動脈収縮反応が低下することを明らかにした。
現在大動脈の収縮・弛緩機能についてのバイオマーカー、大動脈の組織学的評価、血管壁で発現するRNAの定量的解析、血管平滑筋ミオシンの分子機能など）の解析を進めている。今後は各遺伝子型のマウスで大動脈負荷刺激(アンギオテンシン II, βアミノプロピオニトリル等)を行い、大動脈解離発症モデルを作成することを予定する。
また大動脈壁脆弱性等平滑筋機能不全についての基礎的検討としてMyh11変異マウス胎児線維芽細胞を使用し放射線障害・化学障害による細胞老化への反応性相違について検討を行った。p53の発現に関して放射線障害下ではMyh11変異線維芽細胞は初期の遺伝子誘導は高値であるものの48時間以降は野生型に比し減弱する傾向であった。Buslfanによる細胞障害に対しては差異を認めなかった。現在、細胞伸展刺激に対してのFAK等シグナルカスケードの反応性差異をを検討している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
理由
Myh11変異マウスのフェノタイプ解析を目的として平滑筋ミオシンの遺伝子変異（Exon29 del1263K）による家族性大動脈瘤/解離家系を報告し、改良Crispr-Cas9
系で同一変異をC57BL/6マウスに導入した。当マウスは妊孕性が低く、解析対象マウスの確保に以前難渋している。同様に初継代細胞採取による血管平滑筋細胞
培養も遅延しており in vitroでの解析が同様にやや遅延している。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後もMyh11マウスの繁殖を加速させ、大動脈の組織学的評価、血管壁で発現するRNAの定量的解析、血管平滑筋ミオシンの分子機能など）の解析を進める。また各遺伝子型のマウスで大動脈負荷刺激(アンギオテンシン II, βアミノプロピオニトリル等)を行い、大動脈解離発症モデルを作成することを予定し、平滑筋細胞老化と組織脆弱性の関連を評価する。
また線維芽細胞を用いたin vitroの実験系を中心に解析を行い、細胞内mechanotransductionにおけるMyh11変異の重要性についての解析に重点を置く方針とする。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
遅延しているモデルマウスの繁殖を継続し、R5年度ではMYH11変異の大動脈疾患に対しての寄与・細胞老化を介したメカニズムの解明を進める予定としている。またR4年度使用予定の研究費は主に細胞実験試薬や細胞伸展機器の購入借用・免疫染色等解析用実験試薬の購入、マウスモデル研究補助への謝金等に充当する予定としている。
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