| 研究実績の概要 |
ラットの初代継代シュワン細胞培養を行い、p75NTR, P0抗体を用い、シュワン細胞の純度95％以上であることが確認された。その上で、シュワン細胞の上清よりエクソソームの抽出を行った。過去の報告にある方法では、培地内に外因性エクソソームが含有されていることが判明し、外因性エクソソームをすべて除去し、超遠心機を用いてエクソソームを抽出する新たな方法を確立した。粒子径・数を確認できるNanosight、得られた粒子の形態・粒子径を確認できる電子顕微鏡を用いることで平均110nmのCup-Shapedを呈する粒子が得られたことが確認された（エクソソームとして矛盾しない結果）。さらに、エクソソームマーカー・シュワン細胞マーカーを用いWesternblottingを行い純度の高いシュワン細胞由来エクソソームが抽出されたことが実証された。ここで得られたエクソソームを用い、シュワン細胞由来エクソソームが末梢神経障害に果たす機能を確認するため、末梢神経障害のTriggerとして有名なTNFaにFocusを当てて検討を行った。動物モデルとしてTNFa神経内注入モデルを用いた。von Frey testにてTNFa単独注入群と比し有意にTNFa＋シュワン細胞由来エクソソーム注入群で疼痛過敏の抑制を確認した(p<0.05)。またHE・P0・PGP9.5免疫組織染色を行い、TNFa＋シュワン細胞由来エクソソーム群で軸索変性の抑制・脱髄所見の抑制を認めた。またシュワン細胞由来エクソソーム内にTNFaの受容体TNFRF1が豊富に含まれることがWestern blottingで判明し、またライガンドブロットにて、投与した外因性TNFaがシュワン細胞由来エクソソームとバインディングすることが証明された。シュワン細胞由来エクソソームがTNFaに対しDzecoyとして作用していることが立証された。
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