| 研究概要 |
本研究では、ホスファチジルイノシトール(PIs)の脱リン酸化酵素ならびに脂肪酸転移酵素を欠損するマウスの表現型解析とアシル基を保持した脂質の質量分析計による解析を統合的に行う。
機能未知のイノシトールリン脂質であるホスファチジルイノシトール3,4-二リン酸[PI(3,4)P2]を脱リン酸化して分解する酵素には、2つのアイソザイム(L-PIPaseとP-PIPase)が存在する。これまでに、申請者は、両分子の遺伝子欠損マウスを作製・解析し、神経変性や発癌において、L-PIPaseとP-PIPaseの機能の差異を見出している。本年度は、PI(3,4)P2脂肪酸組成の質量分析方法の確立を試みた。PI(3,4)P2は非常に微量であるため、生体試料から高率に回収する必要がある。そこで種々の検討を行った結果、前処理段階でカラムを用いることにより、PIsだけを高率に回収することが可能となった。現在、PIP2の中で多量に存在するPI(4,5)P2の除去について検討を行っている。PI特異的アシルトランスフェラーゼの条件付きノックアウトマウスについては、選択したマウス胚性幹細胞の生殖系列伝播に成功した。現在FLPeトランスジェニックマウスとの交配を進め、薬剤耐性遺伝子の欠失を導いている。
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