|
(1)定量パラメータ解析のための1分子イメージングシステムの改良。昨年度行った、顕微鏡制御PCシステムの統合、4色同期画像取得PCシステム開発をさらに発展させた。全反射照明・薄層斜光(HILO)照明法による1分子イメージング光学顕微鏡系の制御PCシステムと、4色同期画像取得を行っているPCシステムの統合性を高め、定量画像解析システムとの連携を高めた。また、光学系を改良して収差補正を進め、より高画質化による定量解析の質的向上をもたらした。(2)細胞内部での高いS/N比の画像を生かし、細胞内部における分子数・濃度・相互作用時間・解離定数・拡散係数・物理的動態特性といったパラメータを、多種分子・時間・空間の関数として求めることができる1分子画像解析システムを、多色間画像定量解析を重点に改良を進めた。以上の成果により、生きた細胞内部で、ナノ解析による超解像計測が可能となった。これは、分子間相互作用・分子動態の定量解析を大きく前進させるものである。(3)免疫細胞におけるシグナル伝達の1分子イメージング・定量解析。昨年度までに構築済みの多色観察対応した、リセプター・リン酸化酵素・アダプター等のシグナル分子、actin等の細胞骨格、STIM1等のCaシグナル関係分子、ER等の細胞内器官局在マーカー、転写因子等の核内分子と、緑・赤等のGFP変異蛋白質との融合タンパク質を組込み、複数種同時発現させた細胞の1分子観察と定量解析を、今年度までの成果を生かしつつ推進した。(4)細胞シミュレーションプログラム開発。個々の分子動態・相互作用を簡潔な方程式で記述シミュレーションする3次元細胞分子システムプログラムにおいて、動的膜系を導入し、分子間相互作用の多様化対応を進めた。シグナル伝達増幅のS/N評価により、細胞が持つシグナル伝達多様性の意義解明を行った。
|
