| 研究課題/領域番号 |
21249022
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| 研究機関 | 鳥取大学 |
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研究代表者 |
押村 光雄 鳥取大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (20111619)
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| 研究分担者 |
香月 康宏 鳥取大学, 大学院・医学系研究科, 助教 (90403401)
尾崎 充彦 鳥取大学, 大学院・医学系研究科, 助教 (40325006)
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| キーワード | ヒト人工染色体 / 遺伝子治療 / 筋ジストロフィー / 染色体工学 / 間葉系幹細胞 / mesoangioblast細胞 |
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| 研究概要 |
デュシャンヌ型筋ジストロフィー(DMD)はヒトX番染色体上に存在するDMD遺伝子の機能欠損により引き起こされる進行性筋萎縮症である。DMD遺伝子は全長2.4Mbにも及ぶ巨大な遺伝子で複雑な転写調節を受けていると考えられることから2.4Mbの巨大遺伝子を導入するベクターが存在しない。本年度は昨年度に作製したDMD-HACベクターを導入したmdxマウス由来mesoangioblast細胞を用いた治療戦略を行った。
まず、in vivoでDMD-HACベクター導入筋肉細胞を標識すること、ならびに筋分化を誘導するため、核移行LacZ遺伝子ならびにMyoD遺伝子をmdx-mesoangioblast (DMD-HAC)細胞に導入した。これらの細胞をクローン化し、増殖能、分化能をin vitroにおいて解析し、in vivo実験に利用できる細胞を2クローン選別した。これらの細胞を用いて、mdx-ヌードマウスの静脈内に移植し、免疫染色、ウェスタンブロット解析、RT-PCR解析を行った結果、mdx-mesoangioblast (DMD-HAC)由来の細胞が筋肉において生着し、ヒトジストロフィンタンパク質が検出された。来年度は上記細胞を用いて、in vivoでの性能評価を行動解析などにより実施し、自己幹細胞による遺伝子治療モデル構築を目指す。また、より効率よく筋肉に分化誘導できる系の確立や上記実験系のヒト細胞への応用も平行して実施する予定である。
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