血中全蛋白MRM・MS解析とマイクロRNA網羅解析の革新と難治癌病態診断への応用

2011 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21249037
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 高橋 隆 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (50231395)
• 研究分担者: 柳澤 聖 名古屋大学, 医学系研究科, 講師 (20372112)
• キーワード: 分子診断 / 網羅的発現解析 / プロテオミクス / マイクロRNA

研究概要

微量の血清サンプルからのRNA抽出及び低密度アレイによる定量的マイクロRNA測定に関する実験条件の最適化し、さらに低密度アレイを用いた網羅的発現解析を進めた。その結果、健常人血清に比して膵臓癌症例において有意に高発現を示すマイクロRNAを4種類同定することに成功した。これらのマイクロRNAについて、個々にTaqManRT-PCR解析による検証を、健常者血清50サンプルと膵臓癌患者血清10サンプルを用いて行った。さらに、得られた解析データをもとに、これらのマイクロRNAを組み合わせた膵臓癌診断判別モデルの構築を進めた。weighted-voting法による判別モデルを作成し、リスクスコアにもとづいた診断システムとして完成させた。その結果、カットオフ値を超える高値を示した健常者は10%と良好な特異性を示した一方、膵臓癌症例の82.5%がカットオフを上回り(感度82.5%)、非常に高い感度が得られることが明らかとなった。特筆すべきことに、検討した膵臓癌症例には比較的早期のII期の症例も含まれていたが、全く遜色ない頻度で異常値として検出することができた。
血清中に存在する蛋白に関する網羅的な定量発現解析を、安定同位体標識したレポーター試薬(iTRNQ試薬)による標識化とタンデム型質量分析装置を用いて進め、膵臓癌及び正常主膵管組織の新鮮凍結組織において発現を認めた約4000種類の蛋白からマーカー候補蛋白の探索を遂行した。その結果、高発現している候補蛋白の中の一つが膵臓癌細胞の生存に直接関わることを明らかとし、膵臓癌細胞が微小環境下で晒されている小胞体ストレスへの耐性の付与に関わっていることを明らかとした。

研究成果

• [雑誌論文] NKX2-1/TITF1/TTF-1-induced ROR1 is required to sustain EGFR survival signaling in lung adenocarcinoma (2012)
  • 著者名/発表者名: Yamaguchi T, et al
  • 雑誌名: Cancer Cell 巻: 21 ページ: 348-361
  • DOI: DOI10.1016/j.ccr.2012.02.008
  • 査読あり
• [雑誌論文] A critical role for tumor cell-derived angiopoientin-like protein 2 in metastasis (2012)
  • 著者名/発表者名: Endo M, et al
  • 雑誌名: Cancer Research 巻: (in press)
  • DOI: doi:10.1158/0008-5472.CAN-11-3878
  • 査読あり
• [雑誌論文] MYBPH, a transcriptional target of TTF-1, inhibits ROCK1, and reduces cell motility and metastasis (2012)
  • 著者名/発表者名: Hosono Y, et al
  • 雑誌名: EMBO Journal 巻: 31 ページ: 481-493
  • DOI: doi:10.1038/emboj.2011.416
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel network profiling analysis reveals system changes in epithelial-mesenchymal transition (2011)
  • 著者名/発表者名: Shimamura, T., Imoto, S., Shimada, Y., Hosono, Y., Niida, A., Nagasaki, M., Yamaguchi, R., Takahashi, T., Miyano, S
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 6 ページ: e20804
  • DOI: doi:10.1371/journal.pone.0020804
  • 査読あり
• [雑誌論文] miR-375 is activated by ASH1 and inhibits YAP1 in a lineage-dqjendent manner in lung cancer (2011)
  • 著者名/発表者名: Nishikawa E, et al
  • 雑誌名: Cancer Research 巻: 71 ページ: 6165-6173
  • DOI: doi:10.1158/0008-5472.CAN-11-1020
  • 査読あり
• [雑誌論文] Proteasomal non-catalytic subunit PSMD2 as a potential therapeutic target in association with various clinicopathologic features in lung adenocarcinomas (2011)
  • 著者名/発表者名: Matsuyama Y, et al
  • 雑誌名: Molecular Carcinogenesis 巻: 50 ページ: 301-309
  • DOI: DOI10.1002/mc.20632
  • 査読あり
• [雑誌論文] The Epstein-Barr virus LMP 1 and TGF-β1 synergistically induce EMT in lung epithelial cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Sides M, et al
  • 雑誌名: American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology 巻: 44 ページ: 852-862
  • DOI: doi:10.1165/rcmb.2009-0232OC
  • 査読あり
• [雑誌論文] International Association for the Study of Lung Cancer/Amerian Thoracic Society/European Respiratory Society international multidisciplinary classification of lung adenocarcinoma (2011)
  • 著者名/発表者名: Travis WD, et al
  • 雑誌名: Journal of Thoracic Oncology 巻: 6 ページ: 244-285
  • DOI: doi:10.1097/JTO.0b013e318206a221
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mechanisms of amiodarone and desethylamiodarone cytotoxicity in non-transformed human peripheral lung epithelial cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Mulder JE, et al
  • 雑誌名: Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 巻: 336 ページ: 551-559
  • DOI: doi:10.1124/jpet.110.173120
  • 査読あり
• [雑誌論文] Inhibition of cell survival, invasion, tumor growth and histone deacetylase activity by the dietary flavonoid luteolin in human epithelioid cancer cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Attoub S, et al
  • 雑誌名: European Journal of Pharmacology 巻: 651 ページ: 18-25
  • DOI: 10.1016/j.ejphar.2010.10.063
  • 査読あり
• [雑誌論文] let-7 and miR-17-92 : Small-sized major players in lung cancer development (2011)
  • 著者名/発表者名: Osada H, Takahashi T
  • 雑誌名: Cancer Science 巻: 102 ページ: 9-17
  • DOI: DOI:10.1111/j.1349-7006.2010.01707.x
  • 査読あり
• [学会発表] Metastasis-suppressing MYBPH as a novel transcriptional target of TTF-1 lineage-survival oncogene in lung adenocarcinoma (2011)
  • 著者名/発表者名: Takahashi T
  • 学会等名: US-Japan Cancer Genomics Workshop
  • 発表場所: Kyoto, Japan(招待講演)
  • 年月日: 2011-10-25
• [学会発表] miRNA alterations in the pathogenesis of human lung cancer (2011)
  • 著者名/発表者名: Takahashi T
  • 学会等名: The 8^<th> Nikko International Symposium
  • 発表場所: Shimotsuke, Japan(招待講演)
  • 年月日: 2011-10-21
• [学会発表] Roles of ASH1-regulated miRNAs and lincRNAs in lung cancer development (2011)
  • 著者名/発表者名: Osada H, Takahashi T
  • 学会等名: 第70回日本癌学会総会
  • 発表場所: 名古屋(シンポジウム)(招待講演)
  • 年月日: 2011-10-05
• [学会発表] TTF-1 lineage-survival oncogene in the pathogenesis of lung adenocarcinoma (2011)
  • 著者名/発表者名: Takahashi T
  • 学会等名: 第70回日本癌学会総会
  • 発表場所: 名古屋(シンポジウム)(招待講演)
  • 年月日: 2011-10-04
• [備考]
  • URL: http://www.med.nagoya-u.ac.jp/molcar/jp/research.html