研究課題
骨格筋への負荷に応じた神経型一酸化窒素合成酵素nNOSおよびNOの標的分子の探索・抗nNOS抗体を用いた免疫沈降法による標的分子の探索nNOSは骨格筋細胞膜においてα1-syntrophin、dystrophinと結合している。またnNOSは細胞環境の変化に応じて様々な分子と相互作用することで、多様な生命現象を促進することが知られている。平成21年度は、骨格筋への機械的負荷が変化した時にのみnNOSと相互作用する分子を免疫沈降法により探索した。その結果、いくつか候補となり得る分子が確認できたので、今後、標的タンパク質の同定を通して、それらの標的タンパク質がS-ニトロシル化されているかどうか検討する予定である。・biotin-switch法および抗S-ニトロシル化システイン抗体を用いた免疫沈降法による標的分子の探索nNOSにより産生されたNOはタンパク質のシステイン残基と反応し、S-ニトロシル化翻訳後修飾を介してタンパク質機能を制御する。平成21年度は、S-ニトロシル化された部位を特異的にbiotinに置き換えるbiotin-switch法、またS-ニトロシル化された部位を特異的に認識する抗体を用いた免疫沈降法によってnNOSの新規標的分子を探索した。しかしながら、生理条件下におけるNO産生量は少ないためか、標的分子の同定には至っていない。今後、実験系の精度、感度を改善する必要があると考えている。
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