献血を必要としない血小板輸血療法の戦略

2010 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21300160
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 江藤 浩之 東京大学, 医科学研究所, 特任准教授 (50286986)
• キーワード: iPS細胞 / 血小板 / 巨核球 / 遺伝子 / デバイス / MEMS / 不死化細胞株

研究概要

不死化巨核球細胞株の検証と成熟化法の開発
血小板産生可能である巨核球細胞株が実際に成熟可能であるかの検証を行った。
ヒト胚性幹細胞(ES細胞)および血小板産生効率の高い人工多能性幹細胞(iPS細胞)をソースとするCD34+造血前駆細胞集団に候補遺伝子群を薬剤依存性に発現可能なベクターを用いて導入し、巨核球マーカー陽性細胞の不死化に成功した。更に,遺伝子のon-off制御を行い、成熟化するための他の因子(細胞外環境因子の同定と操作法)に目処がたった。次年度はこれらの情報を基盤に本不死化細胞株を用いた血小板産生系を発展させる。
新規のshear stress刺激に伴う血小板産生装置の開発とその検証
血流によって生み出されるshear stress刺激下での血小板産生を促進させるためのデバイスを作製した。MEMS(Micro Electro Mechanical Systems)技術を応用することで25x28mm四方の中に20um径の回路を並列縦走に配置し、巨核球細胞株が固着できるスポットおよび培養液の流れに従ってshear rateが変化できる可変型の閉鎖回路を組み合わせた。実際にプロトタイプのデバイスで、巨核球の細胞質が分断されて行く様子を観察可能となった。最終年度である次年度は,本デバイスの改良と同時に、閉鎖回路での産生された血小板の回収方法を開発していく。これらの巨核球細胞株が実際に成熟すれば,本細胞を実際にデバイス内部でどの程度まで血小板産生効率が上昇できるかを定量化していく。

研究成果

• [雑誌論文] Lnk regulates integrin alphaIIbbeta3 outside-in signaling in mouse platelets, leading to stabilization of thrombus development in vivo. (2010)
  • 著者名/発表者名: Takizawa H, Nishimura S, Takayama N, Oda A, Nishikii H, Morita Y, Kakinuma S, Yamazaki S, Okamura S, Tamura N, Goto S, Sawaguchi A, Manabe I, Takatsu K, Nakauchi H, Takaki S, Eto K.
  • 雑誌名: Journal of Clinical Investigation 巻: 120 ページ: 179-190
  • 査読あり
• [雑誌論文] Essential in vivo roles of the c-type lectin receptor CLEC-2: Embryonic/neonatal lethality of CLEC-2-deficient mice by blood/lymphatic misconnections and impaired thrombus formation of CLEC-2-deficient platelets. (2010)
  • 著者名/発表者名: Suzuki-Inoue K, Inoue O, Ding G, Nishimura S, Hokamura K, Eto K, Kashiwagi H, Tomiyama Y, Yatomi Y, Umemura K, Shin Y, Hirashima M, Ozaki Y.
  • 雑誌名: Journal of Biological Chemistry 巻: 285 ページ: 24494-24507
  • 査読あり
• [雑誌論文] Reduction of N-Glycolylneuraminic Acid in Human Induced Pluripotent Stem Cells Generated or Cultured under Feeder-and Seru m-Free Defined Conditions. (2010)
  • 著者名/発表者名: Hayashi Y, Chan T, Warashina M, Fukuda M, Ariizumi T, O kabayashi K, Takayama N, Otsu M, Eto K, Furue MK, Michiue T, Ohnuma K, Nakauchi H, Asashima M
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 15 ページ: E14099
  • 査読あり
• [雑誌論文] Transient activation of c-MYC expression is critical for efficient platelet generation from human induced pluripotent stem cells. (2010)
  • 著者名/発表者名: Takayama N, Nishimura S, Nakamura S, Shimizu T, Ohnishi R, Endo H, Yamaguchi T, Otsu M, Nishimura K, Nakanishi M, Sawaguchi A, Nagai R, Takahashi K, Yamanaka S, Nakauchi H, Eto K
  • 雑誌名: Journal of Experimental Medicine 巻: 207 ページ: 2817-2830
  • 査読あり
• [学会発表] ES Cells and iPS Cells for Cardiovascular Research (2010)
  • 著者名/発表者名: Eto K, Gary Lyons, Andre Terzic
  • 学会等名: American Heart Association Scientific Session Annual Meeting 2010
  • 発表場所: Chicago, USA
  • 年月日: 2010-12-14
• [学会発表] Generation of Monoclonal TCR-Expressing Human T-Lineage Lymphocytes From Induced Pluripotent Stem Cells of Signal Peripheral T-Ly mphocyte Origin (2010)
  • 著者名/発表者名: Nishimura T, Kaneko S, Gotoh H, Takayama N, Shimizu T, Iriguchi S, Tajima Y, Yasui Y, Watanabe N, Takahashi S, Eto K, Nakauchi H
  • 学会等名: 52st American Society of Hematology Annual Meeting
  • 発表場所: Orlando, U.S.A
  • 年月日: 2010-12-06
• [学会発表] Epigenetic Memory Enables the Dominant Generation of Adult-Type Erythrocytes From Human Induced Pluripotent Stem Cells (2010)
  • 著者名/発表者名: Takayama N, Sano S, Shimizu T, Kawahata R, Endo H, Nakamura S, Ogawa S, Nakauchi H, Eto K
  • 学会等名: 52st American Society of Hematology Annual Meeting
  • 発表場所: Orlando, U.S.A
  • 年月日: 2010-12-06
• [学会発表] In vivo imaging reveals multi-cellular kinetics in pathological conditions including metabolic syndrome and thrombus formation (2010)
  • 著者名/発表者名: Nishimura S, Nagasaki M, Manabe I, Eto K, Kadowaki T, Nagai R.
  • 学会等名: 第71回日本血液学会学術総会
  • 発表場所: 京都国際会議場
  • 年月日: 2010-10-24
• [学会発表] c-MYC再活性化に伴うヒトiPS細胞からの効率の良い巨核球/血小板産生法の確立 (2010)
  • 著者名/発表者名: 高山直也、中村壮、大西椋子、澤口朗、高橋和利、山中伸弥、江藤浩之、中内啓光
  • 学会等名: 第71回日本血液学会学術総会
  • 発表場所: 京都国際会議場
  • 年月日: 2010-10-24
• [学会発表] Novel Target of Ex Vivo Expansion; Integrin avβ3 Ligation Enables Regulation of Hematopoietic Stem Cell Division Leading to Maintenance of Reconstitution Potential (2010)
  • 著者名/発表者名: Koji Eto
  • 学会等名: The 1st ISCT Asia-Pacific Regional Meeting
  • 発表場所: Miyazaki, Japan 宮崎県フェニクスシーガイアリゾート サミットホール
  • 年月日: 2010-10-19
• [学会発表] Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Blood Cells toward Clinical Application (2010)
  • 著者名/発表者名: Koji Eto
  • 学会等名: The 1st ISCT Asia-Pacific Regional Meeting
  • 発表場所: 宮崎県フェニクスシーガイアリゾート サミットホール
  • 年月日: 2010-10-18
• [学会発表] R995W mutation in integrin α IIb-gene (ITGA2B) is a novel cause for congenital macrothrombocytopenia (2010)
  • 著者名/発表者名: Kousaku Matsubara, Shinji Kunishima, Toshiro Takafuta, Yoshiko Uchida, Takashi Fukakya, Daichi Inoue, Hiroakazu Kashiwagi, Yoshiaki Tomiyama, Makoto Otsu, Koji Eto, Masafumi Onodera
  • 学会等名: 第72回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 横浜 パシフィコ横浜
  • 年月日: 2010-09-26
• [学会発表] Human iPS cells from Blood and Blood from iPS cells (2010)
  • 著者名/発表者名: Koji Eto
  • 学会等名: Hematopoiesis in Health and Disease in Lund
  • 発表場所: Lund, Sweden
  • 年月日: 2010-05-17
• [学会発表] Lnk/Sh2b3による血小板シグナルおよび線溶系制御を介した止血血栓制御機構 (2010)
  • 著者名/発表者名: 江藤浩之、西村智、真鍋一郎、柿沼晴、小田淳、永井良三、中内啓光、高木智.
  • 学会等名: 第33回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 鹿児島.城山観光ホテル
  • 年月日: 2010-04-24
• [学会発表] 巨核球造血,血小板産生異常を呈する病態解析細胞モデルの開発 (2010)
  • 著者名/発表者名: 大西椋子、高山直也、大津真、西村智、西範、浜崎雄平、石井榮一、小田淳、國島伸治、中内啓光、江藤浩之
  • 学会等名: 第33回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 鹿児島.城山観光ホテル
  • 年月日: 2010-04-23
• [図書] ips細胞からの血小板への分化誘導と新しい輸血システムの開発 (2010)
  • 著者名/発表者名: 江藤浩之、高山直也、西村智
  • 総ページ数: 28(2):217-222
  • 出版者: 実験医学
• [図書] 治療学特集「抗血栓療法適切な治療戦略の選択とその評価」基礎的領域から (2010)
  • 著者名/発表者名: 江藤浩之、高山直也、西村智
  • 総ページ数: 44(6):645-649
  • 出版者: ライフサイエンス出版
• [産業財産権] 血栓形成を抑制する作用を有する組成物 (2010)
  • 発明者名: 江藤浩之、西村智、中内啓光、岩倉洋一郎
  • 権利者名: 陣京大学
  • 産業財産権番号: 特願2010-180781
  • 出願年月日: 2010-08-12
• [産業財産権] 多能性幹細胞からの血液細胞分化に関する培養方法 (2010)
  • 発明者名: 佐野進弥、江藤浩之、高山直也、中内啓光
  • 権利者名: 東京大学テルモ株式会社
  • 産業財産権番号: 特願2010-202752
  • 出願年月日: 2010-09-10
• [産業財産権] 分化細胞の新規製造法 (2010)
  • 発明者名: 江藤浩之、高山直也、中村壮、中内啓光、高山直也、中村壮、中内啓光
  • 権利者名: 東京大学
  • 産業財産権番号: PCT/JP2010/65903
  • 出願年月日: 2010-09-15