| 研究課題/領域番号 |
21310133
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
坂口 和靖 北海道大学, 大学院・理学研究院, 教授 (00315053)
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| 研究分担者 |
今川 敏明 北海道大学, 大学院・理学研究院, 准教授 (20142177)
中馬 吉郎 北海道大学, 大学院・理学研究院, 助教 (40372263)
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| キーワード | 蛋白質 / 癌 / シグナル伝達 / 進化 / 生体分子 / 生体分子 |
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| 研究概要 |
p53の四量体形成はその機能発現に必須である。ヒト悪性腫瘍において、p53四量体形成ドメイン31アミノ酸残基中、24残基に49個のミスセンス変異が報告されている。これらの変異によるp53機能の不活性化機構の解明は、p53遺伝子のミスセンス変異による細胞癌化を理解する上できわめて重要である。一方、p53タンパク質は、魚類から哺乳類に至まで広く脊椎動物において存在している。本研究では、『癌抑制タンパク質p53の四量体形成ドメイン変異および進化的置換による四量体形成とそれに引き続く生物イベントを定量的に解析し、p53四量体安定性と機能不全との間の閾値問題を解明する』ことを目的としている。
変異型p53タンパク質のDNA結合能・翻訳後修飾を厳密に定量化するためには、純粋なタンパク質を得る必要がある。このため、各種無細胞発現系を用い、タンパク質発現の条件検討を実施した。しかしながら、純度の高い目的の変異型p53タンパク質を十分量得ることはできなかった。そのため、測定系について、無細胞発現タンパク質を用いるin vitro系から生細胞株を用いるin vivo系へ変更することとした。具体的には、内因性のp53を欠損している肺がん由来H1299を母体として、bimolecular fluorescent complementation法を用いることとし、生理学的濃度において転写活性を測定可能な蛍光タンパク質リポータアッセイ法を用いた感度の高い解析系の構築を目指す。
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