電子顕微鏡による複合体1及びV-ATPaseの構造解析

2011 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 21370042
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 構造生物化学
• 研究機関: 京都産業大学 (2010-2011); 東京工業大学 (2009)
• 研究代表者: 横山 謙 京都産業大学, 総合生命科学部, 教授 (70271377)
• 研究分担者: 光岡 薫 産業技術総合研究所, バイオメディシナル情報研究センター, 研究チーム長 (60301230)
• 研究期間 (年度): 2009 – 2011
• キーワード: ATP / 呼吸 / 構造 / 活性酸素 / 電子顕微鏡

研究概要

好熱菌由来V-ATPaseおよび、膜内在性のローターリングの二次元結晶を作成した。Intact V-ATPaseの再構成像を構築したが分解能が低く、結晶化条件を検討している。ローターリングに関しては、クライオ電子顕微鏡像からの3次元再構成により7□分解能のモデルが構築できた。原子分解能を出すために結晶シートのスタッキングを解消する条件検討を実施している。呼吸鎖複合体Iのヒスタグ精製系を構築し、単粒子解析の結果intactであることが判明した。膜に包埋した機能状態での単粒子解析を進める。

研究成果

• [雑誌論文] Expression of ATP sensor protein in Caenorhabditis elegans (2012)
  • 著者名/発表者名: J. Kishikawa, M. Fujikawa, H. Imamura, K. Yasuda, H. Noji, N. Ishii, S. Mitani, and K. Yokoyama
  • 雑誌名: Microsc. Res. Tech 巻: 75(1) ページ: 15-9
  • DOI: doi:10.1002/jemt.21103
• [雑誌論文] Resolving stepping rotation in Thermus thermophilus H^+-ATPase/synthase with an essentially drag free probe (2011)
  • 著者名/発表者名: Furuike, S, Nakano, M., Adachi, K., Noji, H., Kinosita Jr., K., and Yokoyama, K.
  • 雑誌名: Nature Communications 巻: Vol 2 ページ: 223-239
  • DOI: doi:10.1038/ncomms1215
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mechanism of inhibition of Tributyltin chloride of the V type Molecular Motor (2009)
  • 著者名/発表者名: Takeda M, Ikeda C, Shimabukuro K, Yoshida M, Yokoyama K
  • 雑誌名: Biophysical J 巻: Vol 96 ページ: 1210-1217
  • DOI: doi:10.1016/j.bpj.2008.10.031
  • 査読あり
• [雑誌論文] K. Cryo-EM structure of the native GroEL-GroES complex from thermos thermophilus encapsulating substrate inside the cavity (2009)
  • 著者名/発表者名: K, Taguchi、H, Mitsuok
  • 雑誌名: Structure 巻: Vol18 ページ: 287-293
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cryo-EM structure of the native GroEL-GroES complex from thermos thermophilus encapsulating substrate inside the cavity (2009)
  • 著者名/発表者名: Kanno R, Koike-Takeshita A, Yokoyama K, Taguchi H, Mitsuoka K
  • 雑誌名: Structure 巻: Vol18 ページ: 287-293
  • DOI: 10.1016/j.str.2008.12.012
  • 査読あり
• [雑誌論文] Crystal structure of A3B3 compiex of V-ATP from Thermus thermophilus (2009)
  • 著者名/発表者名: Maher MJ, Akimoto S, Iwata M, Nagata K, Hori Y, Yoshida M, Yokoyama S, Iwata S, Yokoyama K
  • 雑誌名: EMBO J 巻: Vol28 ページ: 3771-3779
  • DOI: doi:10.1038/emboj.2009.310
  • 査読あり
• [学会発表] 回転分子モーターの軸サブユニットの分子進化 (2011)
  • 著者名/発表者名: 岸川淳一, 伊吹達也, 南野徹, 難波啓一, 中西温子, 宮田知子, 今田勝巳, 横山謙
  • 学会等名: 第37回日本生体エネルギー研究会討論会
  • 発表場所: 京都市
  • 年月日: 2011-12-20
• [学会発表] ATP concentration change in Ca enorhabditis elegans (2011)
  • 著者名/発表者名: J. Kishikawa, M. Fujikawa, H. Imamura, K. Yasuda, H. Noji, S. Mitani, and K. Yokoyama
  • 学会等名: The 34th annual me eting of the molecular biology society of Japan
  • 発表場所: Yokohama
  • 年月日: 2011-12-14
• [学会発表] 無負荷回転プローブによる好熱菌VoV_1/V_1のステップ解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 古池晶, 木下一彦, 横山謙
  • 学会等名: 36回日本生体エネルギー研究会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2010-11-19
• [学会発表] Resolving s tepping rotation of V-ATPase with an es sentially drag-free probe (2010)
  • 著者名/発表者名: Furuike S, Nakano M, Adachi K, Noji H, Kinoshita K Jr, Yokoyama K
  • 学会等名: 16th European Bioenegetics conference
  • 発表場所: ポーランド
  • 年月日: 2010-07-18
• [備考]
  • URL: http://www.cc.kyoto-su.ac.jp/～yokoken/index-j.htm