| 研究課題/領域番号 |
21370044
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
後藤 祐児 大阪大学, 蛋白質研究所, 教授 (40153770)
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| 研究分担者 |
櫻井 一正 大阪大学, 蛋白質研究所, 助教 (10403015)
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| キーワード | アミロイド蛋白質 / 脳神経疾患 / 透析アミロイドーシス / 脳神経疾患 / アルツハイマー病 / 糖尿病 / 蛍光顕微鏡 / NMR |
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| 研究概要 |
透析アミロイドーシスの原因となるβ2ミクログロブリン、アルツハイマー病の原因となるアミロイドβ、II型糖尿病の原因となるIslet Amyloid Polypeptide (IAPP)、角膜変性症の原因となるケラトエピセリンを材料として、全反射蛍光顕微鏡による一線維・リアルタイム解析を行い、アミロイド超分子構造の形成機構を探った。これと並行して、溶液NMRと重水素交換反応を組み合わせた構造解析を行い、アミロイド中間体の立体構造を解析した。
(1) 全反射蛍光顕微鏡によるアミロイド線維形成反応の一線維・リアルタイム観察:全反射蛍光顕微鏡を用いて、アミロイド超分子構造形成の分子機構に関する研究を進めた。特にケラトエピセリンの部分ペプチドを用いて、レーザー光によるアミロイドの損傷の直接観察を進めた。レーザーによるアミロイドの破壊を利用することによって、アミロイドーシスの新たな治療方法を開発できることを示唆した。
(2) 溶液NMRによる線維中間体の解析:重水素交換-溶液NMR解析によって、β2ミクログロブリンの線維形成中間体の解析を更に進めた。線維の側面に結合した初期中間体が生じる原因を、蛋白質の溶解性の視点から考察した。
(3) マイクロプレートリーダの活用:マイクロプレートリーダと超音波処理と組み合わせたアミロイドアッセイ法を開発して、さまざまな蛋白質やペプチドのアミロイド形成反応を解析した。そして、アミロイドは、過飽和条件下で比較的短いペプチドや蛋白質が析出することによって形成する固体構造であることを提唱した。
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