| 研究課題/領域番号 |
21380170
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
麻生 久 東北大学, 大学院・農学研究科, 教授 (50241625)
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| 研究分担者 |
大和田 修一 東北大学, 大学院・農学研究科, 助教 (00183244)
渡邊 康一 東北大学, 大学院・農学研究科, 助教 (80261494)
北澤 春樹 東北大学, 大学院・農学研究科, 准教授 (10204885)
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| キーワード | M細胞 / プリオン蛋白 / トランスサイトーシス / 膜蛋白 / 輸送小胞体 / aldolase A / 親和性 / Far western blot解析 |
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| 研究概要 |
本研究課題は、経口摂取プリオン蛋白の腸管 M 細胞を介した侵入機構の解明を目的とする。世界に先駆けて樹立に成功したウシおよびマウスの腸管上皮細胞株の M 細胞分化誘導系と磁気ビーズ蛋白捕捉法を用いて、腸管上皮M細胞のプリオン蛋白取り込みに関わる膜輸送蛋白複合体トランスポートゾームライブラリーを構築し、M 細胞のプリオン蛋白取り込みに関わる蛋白の同定と発現調節機構の解明を試みるものである。我々は、M細胞に分化誘導したウシ腸管上皮細胞がプリオン蛋白結合磁気ビーズを取り込んだ細胞内小胞を回収し、解糖系酵素aldolase Aの同定したに成功した。本年度は、aldolase Aの細胞における存在様式およびプリオン蛋白との親和性を明らかにすることを試みた。【方法】組み換え型ウシPrPを精製した。ウシ腸管上皮細胞株をM細胞に分化誘導させ、抗aldolase A抗体を用いた免疫染色を行った。aldolase Aとプリオン蛋白との親和性は、アルドラーゼA発現が確認されている樹立したウシ神経前駆細胞株より抽出した蛋白をSDS-PAGE後にメンブランへ転写し、プリオン蛋白を処理してその結合性を判定するFar Western Blot解析を行った。【結果】BIE細胞はaldolase Aを発現し、M 細胞に分誘導することによりその発現が増加した。また、aldolaseAはBIE細胞の頂端側に染色された。Aldolase Aはプリオン蛋白と結合し、その結合はメンブラン転写後に抗aldolaseA抗体で処理することにより特異的に阻害されることが、Far Western Blot解析より明らかとなった。以上より、ウシ腸管 M 細胞に特異的に発現するaldolase Aは、プリオン蛋白に特異的な親和性を有することが判明し、経口摂取した異状プリオン蛋白の腸管における侵入機構に関わっている可能性が示された。
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