| 研究課題/領域番号 |
21380185
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
稲波 修 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 教授 (10193559)
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| 研究分担者 |
稲葉 睦 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 教授 (00183179)
堀内 基広 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 教授 (30219216)
桑原 幹典 北海道大学, 名誉教授 (10002081)
山盛 徹 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 准教授 (00512675)
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| キーワード | プリオン / 構造生物学 / ESR分光法 / ニトロオキシドプローブ / 距離情報 / 部位特異的スピンラベル法 / 人獣共通感染症 / インフルエンザ |
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| 研究概要 |
平成22年度は初年度で確立した部位特異的スピンラベル法による2点間距離計測技術をプリオン凝集体の構造解析に適用を広げることを目的に研究を推進した。測定系の確立は遺伝的プリオン病の変異体D178Nのαヘリックス2上のT188にスピンプローブ(R1)を導入したD178N/T188R1で行い、連続波ESRにより凝集体では1.8nmであることを明らかにした。pH4.0で1M塩酸グアニジン処理すると凝集体構造を形成することはAFMによるフィラメント構造の観察により確かめられた。本年度は引き続き解析を進め、オクタリピートの最後部分でランダムコイル構造のD178N/S97R1、αヘリックス1のD178N/D144R1、αヘリックス2のD178N/R204R1とD178N/Y225R1について同様に検討した。どの場所でも凝集体のスピン間の距離は1.5nm～2.0nmの間の値が持続波ESR法で検出された。パルスESR法でも計測範囲の短距離限界を示し、周期的で規則正しい構造ではなく、凝集体中の同じアミノ酸残基の分子間の距離は1.5nm～2.0nm程度の間隔を持つランダムに凝集体を形成している可能性を示していると類推された。既に他の研究者によって電子顕微鏡像から得られたシミュレーションでは規則正しい対称構造モデルが提唱されており、オクタリピートを除いたブリオンタンパク質凝集体の構造について、同様方法を用いた報告では107～229までのαヘリックスやβシートを形成している部位全域で1nm以下のほぼ密接した分子間距離を示し、βシート形成を基盤とした規則正しい構造モデルを提唱している。しかしながら本研究では全長プリオンタンパク質では全く違う構造を取っている可能性が示唆された。この考え方が正しいかどうかは、最終年度、測定点を増やし、実測に基づいた凝集体モデルを構築する予定である。
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