| 研究課題/領域番号 |
21390188
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
信國 好俊 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 准教授 (80295641)
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| 研究分担者 |
堂前 純子 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 准教授 (70227700)
烏帽子田 彰 広島大学, 大学院・医歯(薬)学総合研究科, 教授 (50168811)
藤本 成明 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 准教授 (40243612)
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| キーワード | 高脂血症 / 脂質代謝 / 脂質輸送 / ゲノム機能学 / 細胞機能遺伝学 / ジーントラップ / 分子疫学 / 予防医学 |
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| 研究概要 |
高脂血症と動脈硬化の予防を目的に、(1)「大規模ジーントラップ挿入変異細胞ライブラリー」を用いたゲノム機能学的方法による「コレステロール細胞内代謝輸送に関与する遺伝子群のスクリーニングと機能解析」。(2)その情報を基に「高脂血症・動脈硬化発症関連候補遺伝子」の解明と絞り込み。(3)「高脂血症患者の候補遺伝子解析」について研究を進めた。
1.細胞内コレステロール代謝輸送変異株でトラップされた遺伝子の同定:これまでに単離した変異細胞株188クローンについて、トラップ(同時に破壊)された遺伝子を、5'-RACE/シークエンス/BLAST検索によって同定する。既に64クローンについて解析が終了しているが、残り124クローンについて順次解析を進めている。
2.変異細胞株におけるコレステロール代謝輸送動態の解析:変異細胞株における障害遺伝子の機能解明を目的に、標識LDL(DiI-LDL)を用いたトレーサー実験、Filipin染色によるコレステロール蓄積、LDL取り込み能、HDL新生能の検討の準備を進めた。
3.コレステロール代謝輸送関連遺伝子の機能解析:トラップされた遺伝子の機能解析を目的に、micro-RNA(miRNA)を用いた正常細胞での遺伝子ノックダウン、あるいは変異細胞への正常遺伝子導入実験を進めた。ABCA7誘導発現293細胞を作製するとともに、変異Lamin A/C遺伝子発現ベクター、PI3Kinase遺伝子ノックダウン用miRNA発現ベクターを構築し、レポーターアッセイでその機能を確認した。
4.高脂血症患者の候補遺伝子解析:候補遺伝子解析・分子疫学的解析を目的に、これまでに高脂血症患者83症例のDNAサンプルを収集した。さらに、Lamin-A/C遺伝子の全12エクソンついて、ゲノムDNAの増幅とシークエンスの条件設定を終了した。
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