臨床的に治療抵抗性な遺伝子型1bのC型肝炎ウイルス培養系樹立とその解析

2011 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 21390235
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 消化器内科学
• 研究機関: 国立感染症研究所
• 研究代表者: 脇田 隆字 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 部長 (40280789)
• 研究期間 (年度): 2009 – 2011
• キーワード: 肝臓学

研究概要

C型肝炎ウイルス(HCV)感染症は持続感染化して慢性肝炎から肝硬変、肝臓癌に至る疾患を引き起こす。特に遺伝子型1bかつ高ウイルス量症例では50-60%の治癒率であり、いまだ十分ではない。本研究では、臨床的に治療が困難な遺伝子型1bのC型肝炎ウイルスのウイルス感染性クローンを樹立することにより、治療抵抗性に関する遺伝子領域を解析し、遺伝子型1bHCVの治療抵抗性の分子機構を解明することを目標とした。構築した遺伝子型1bの感染性ウイルス粒子を産生する全長ウイルス構築を用いて感染性ウイルス産生を検討した。野生型構築に比べて、適合変異を導入した構築ではウイルス産生能の向上が観察できた。全長ウイルスゲノム導入細胞の継続培養ではウイルス感染細胞が徐々に減少し、2.3ヶ月の培養を経て上清中のウイルスがほとんど検出不能となった。さらにウイルスゲノムに導入する変異の組み合わせを検討することにより、最も感染性ウイルス産生能の高い遺伝子型1bのウイルス構築を樹立した。この実験系により、ウイルスゲノム導入細胞の培養上清中にウイルス粒子が分泌される。分泌されたウイルス粒子はnaiveな培養細胞に感染性があることを観察した。また、遺伝子型1bのウイルスゲノムの一部を遺伝子型2aのJFH-1株の遺伝子に組換えたキメラウイルスゲノムを作製し、NS5bを遺伝子型1bに組換えたウイルス構築を作製した。この組換えウイルスを使用して、ポリメラーゼ阻害剤の感受性プロファイルを検討した。これらの組換えウイルスは遺伝子型1bの抗ウイルス薬開発、薬剤耐性ウイルス解析に有用である。

研究成果

• [雑誌論文] Replication and infectivity of a novel genotype 1b hepatitis C virus clone (2012)
  • 著者名/発表者名: Date T, Morikawa K, Tanaka Y, Tanaka-Kaneko K, Sata T, Mizokami M, Wakita T
  • 雑誌名: Microbiol Immunol
  • DOI: doi:10.1111/j.1348-0421.2012.00437.x
• [雑誌論文] Detergent-induced activation of the hepatitis C virus genotype 1b RNA polymerase (2012)
  • 著者名/発表者名: Weng L, Kohara M, Wakita T, Shimotohno K, Toyoda T
  • 雑誌名: Gene 巻: 496(2) ページ: 79-87
• [雑誌論文] Potent and selective inhibition of hepatitis C virus replication by novel phenanthridinone derivatives (2011)
  • 著者名/発表者名: Salim MT, Aoyama H, Sugita K, Watashi K, Wakita T, Hamasaki T, Okamoto M, Urata Y, Hashimoto Y, Baba M
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 415(4) ページ: 714-9
• [雑誌論文] Genetic Variation of the IL-28B Promoter Affecting Gene Expression (2011)
  • 著者名/発表者名: Sugiyama M, Tanaka Y, Wakita T, Nakanishi M, Mizokami M
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 6(10) ページ: e26620
• [雑誌論文] Hepatitis C virus reveals a novel early control in acute immune response (2011)
  • 著者名/発表者名: Arnaud N, Dabo S, Akazawa D, Fukasawa M, Shinkai-Ouchi F, Hugon J, Wakita T, Meurs EF
  • 雑誌名: PLoS Pathog 巻: 7(10) ページ: e1002289
• [雑誌論文] Role of the endoplasmic reticulum-associated degradation(ERAD) pathway in degradation of hepatitis C virus envelope proteins and production of virus particles (2011)
  • 著者名/発表者名: Saeed M, Suzuki R, Watanabe N, Masaki T, Tomonaga M, Muhammad A, Kato T, Matsuura Y, Watanabe H, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: J Biol Chem 巻: 286(43) ページ: 37264-73
• [雑誌論文] Development of recombinant hepatitis C virus with NS5A from strains of genotypes 1 and 2 (2011)
  • 著者名/発表者名: Okamoto Y, Masaki T, Murayama A, Munakata T, Nomoto A, Nakamoto S, Yokosuka O, Watanabe H, Wakita T, Kato T
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 410(3) ページ: 404-9
• [雑誌論文] Structural requirements of virion-associated cholesterol for infectivity, buoyant density and apolipoprotein association of hepatitis C virus (2011)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto M, Aizaki H, Fukasawa M, Teraoka T, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: J Gen Virol 巻: 92(Pt9) ページ: 2082-7
• [雑誌論文] Production and characterization of HCV particles from serum-free culture (2011)
  • 著者名/発表者名: Akazawa D, Morikawa K, Omi N, Takahashi H, Nakamura N, Mochizuki H, Date T, Ishii K, Suzuki T, Wakita T
  • 雑誌名: Vaccine 巻: 29(29-30) ページ: 4821-8
• [雑誌論文] In vivo adaptation of hepatitis C virus in chimpanzees for efficient virus production and evasion of apoptosis (2011)
  • 著者名/発表者名: Saeed M, Shiina M, Date T, Akazawa D, Watanabe N, Murayama A, Suzuki T, Watanabe H, Hiraga N, Imamura M, Chayama K, Choi Y, Krawczynski K, Liang TJ, Wakita T, Kato T
  • 雑誌名: Hepatology 巻: 54(2) ページ: 425-33
• [雑誌論文] Hokuriku Liver Study Group. Malnutrition impairs interferon signaling through mTOR and FoxO pathways in patients with chronic hepatitis C (2011)
  • 著者名/発表者名: Honda M, Takehana K, Sakai A, Tagata Y, Shirasaki T, Nishitani S, Muramatsu T, Yamashita T, Nakamoto Y, Mizukoshi E, Sakai Y, Yamashita T, Nakamura M, Shimakami T, Yi M, Lemon SM, Suzuki T, Wakita T, Kaneko S
  • 雑誌名: Gastroenterology 巻: 141(1) ページ: 128-140
• [雑誌論文] Development of mouse hepatocyte lines permissive for hepatitis C virus(HCV) (2011)
  • 著者名/発表者名: Aly HH, Oshiumi H, Shime H, Matsumoto M, Wakita T, Shimotohno K, Seya T
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 6(6) ページ: e21284
• [雑誌論文] Impaired antiviral activity of interferon alpha against hepatitis C virus 2a in Huh-7 cells with a defective Jak-Stat pathway (2010)
  • 著者名/発表者名: Hazari S, Chandra PK, Poat B, Datta S, Garry RF, Foster TP, Kousoulas G, Wakita T, Dash S
  • 雑誌名: Virol J 巻: 7(1) ページ: 36
• [雑誌論文] 2', 5'-Oligoadenylate synthetase-like gene highly induced by hepatitis C virus infection in human liver is inhibitory to viral replication in vitro (2010)
  • 著者名/発表者名: Ishibashi M, Wakita T, Esumi M
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 392(3) ページ: 397-402
• [雑誌論文] Identification of hepatitis C virus genotype 2a replicon variants with reduced susceptibility to ribavirin (2010)
  • 著者名/発表者名: Hmwe SS, Aizaki H, Date T, Murakami K, Ishii K, Miyamura T, Koike K, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: Antiviral Res 巻: 85(3) ページ: 520-524
• [雑誌論文] Requirement of cellular DDX3 for hepatitis C virus replication is unrelated to its interaction with the viral core protein (2010)
  • 著者名/発表者名: Angus AG, Dalrymple D, Boulant S, McGivern DR, Clayton RF, Scott MJ, Adair R, Graham S, Owsianka AM, Targett-Adams P, Li K, Wakita T, McLauchlan J, Lemon SM, Patel AH
  • 雑誌名: J Gen Virol 巻: 91(1) ページ: 122-32
• [雑誌論文] Ethanol enhances hepatitis C virus replication through lipid metabolism and elevated NADH/NAD+ (2010)
  • 著者名/発表者名: Seronello S, Ito C, Wakita T, Choi J
  • 雑誌名: J Biol Chem 巻: 285(2) ページ: 845-54
• [雑誌論文] Infectivity of hepatitis C virus is influenced by association with apolipoprotein E isoforms (2010)
  • 著者名/発表者名: Hishiki T, Shimizu Y, Tobita R, Sugiyama K, Ogawa K, Funami K, Ohsaki Y, Fujimoto T, Takaku H, Wakita T, Baumert TF, Miyanari Y, Shimotohno K
  • 雑誌名: J Virol 巻: 84(22) ページ: 12048-57
• [雑誌論文] Hepatitis C virus NS2 protein triggers endoplasmic reticulum stress and suppresses its own viral replication (2010)
  • 著者名/発表者名: von dem Bussche A, Machida R, Li K, Loevinsohn G, Khander A, Wang J, Wakita T, Wands JR, Li J
  • 雑誌名: J Hepatol 巻: 53(5) ページ: 797-804
• [雑誌論文] Cell culture and in vivo analyses of cytopathic hepatitis C virus mutants (2010)
  • 著者名/発表者名: Mishima K, Sakamoto N, Sekine-Osajima Y, Nakagawa M, Itsui Y, Azuma S, Kakinuma S, Kiyohashi K, Kitazume A, Tsuchiya K, Imamura M, Hiraga N, Chayama K, Wakita T, Watanabe M.
  • 雑誌名: Virology 巻: 405(2) ページ: 361-9
• [雑誌論文] Production of infectious hepatitis C virus in primary cultures of human adult hepatocytes (2010)
  • 著者名/発表者名: Podevin P, Carpentier A, Pene V, Aoudjehane L, Carriere M, Zaidi S, Hernandez C, Calle V, Meritet JF, Scatton O, Dreux M, Cosset FL, Wakita T, Bartenschlager R, Demignot S, Conti F, Rosenberg AR, Calmus Y
  • 雑誌名: Gastroenterology 巻: 139(4) ページ: 1355-64
• [雑誌論文] A disulfide-bonded dimer of the core protein of hepatitis C virus is important for virus-like particle production (2010)
  • 著者名/発表者名: Kushima Y, Wakita T, Hijikata M
  • 雑誌名: J Virol 巻: 84(18) ページ: 9118-27
• [雑誌論文] Primary hepatocyte culture supports hepatitis C virus replication : a model for infection-associated hepatocarcinogenesis (2010)
  • 著者名/発表者名: Banaudha K, Orenstein JM, Korolnek T, St Laurent GC 3rd, Wakita T, Kumar A
  • 雑誌名: Hepatology 巻: 51(6) ページ: 1922-32
• [雑誌論文] La protein required for internal ribosome entry site-directed translation is a potential therapeutic target for hepatitis C virus replication (2010)
  • 著者名/発表者名: Shirasaki T, Honda M, Mizuno H, Shimakami T, Okada H, Sakai Y, Murakami S, Wakita T, Kaneko S
  • 雑誌名: J Infect Dis 巻: 202(1) ページ: 75-85
• [雑誌論文] Hepatitis C virus controls interferon production through PKR activation (2010)
  • 著者名/発表者名: Arnaud N, Dabo S, Maillard P, Budkowska A, Kalliampakou KI, Mavromara P, Garcin D, Hugon J, Gatignol A, Akazawa D, Wakita T, Meurs EF
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 5(5) ページ: e10575
• [雑誌論文] RNA polymerase activity and specific RNA structure are required for efficient HCV replication in cultured cells (2010)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Weng L, Date T, Akazawa D, Tian X, Suzuki T, Kato T, Tanaka Y, Mizokami M, Wakita T, Toyoda T
  • 雑誌名: PLoS Pathog 巻: 6(4) ページ: e1000885
• [雑誌論文] Biological properties of purified recombinant HCV particles with an epitope-tagged envelope (2010)
  • 著者名/発表者名: Takahashi H, Akazawa D, Kato T, Date T, Shirakura M, Nakamura N, Mochizuki H, Tanaka-Kaneko K, Sata T, Tanaka Y, Mizokami M, Suzuki T, Wakita T
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 395(4) ページ: 565-71
• [雑誌論文] Production of infectious hepatitis C virus by using RNA polymerase I-mediated transcription (2010)
  • 著者名/発表者名: Masaki T, Suzuki R, Saeed M, Mori K, Matsuda M, Aizaki H, Ishii K, Maki N, Miyamura T, Matsuura Y, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: J Virol 巻: 84(11) ページ: 5824-35
• [雑誌論文] HCV genotype 1b chimeric replicon with NS5B of JFH-1 exhibited resistance to cyclosporine A (2009)
  • 著者名/発表者名: Abe K, Ikeda M, Ariumi Y, Dansako H, Wakita T, Kato N
  • 雑誌名: Arch Virol 巻: 154(10) ページ: 1671-7
• [雑誌論文] Evaluation of hepatitis C virus core antigen assays in detecting recombinant viral antigens of various genotypes (2009)
  • 著者名/発表者名: Saeed M, Suzuki R, Kondo M, Aizaki H, Kato T, Mizuochi T, Wakita T, Watanabe H, Suzuki T
  • 雑誌名: J Clin Microbiol 巻: 47(12) ページ: 4141-3
• [雑誌論文] Identification of bisindolylmaleimides and indolocarbazoles as inhibitors of HCV replication by tube-capture-RT-PCR (2009)
  • 著者名/発表者名: Murakami Y, Noguchi K, Yamagoe S, Suzuki T, Wakita T, Fukazawa H
  • 雑誌名: Antiviral Res 巻: 83(2) ページ: 112-7
• [雑誌論文] Double-stranded RNA-induced interferon-beta and inflammatory cytokine production modulated by hepatitis C virus serine proteases derived from patients with hepatic diseases (2009)
  • 著者名/発表者名: Dansako H, Ikeda M, Ariumi Y, Wakita T, Kato N
  • 雑誌名: Arch Virol 巻: 154(5) ページ: 801-10
• [雑誌論文] Modification of hepatitis C virus 1b RNA polymerase to make a highly active JFH1-type polymerase by mutation of the thumb domain (2009)
  • 著者名/発表者名: Weng L, Du J, Zhou J, Ding J, Wakita T, Kohara M, Toyoda T
  • 雑誌名: Arch Virol 巻: 154(5) ページ: 765-73
• [雑誌論文] Involvement of creatine kinase B in hepatitis C virus genome replication through interaction with the viral NS4A protein (2009)
  • 著者名/発表者名: Hara H, Aizaki H, Matsuda M, Shinkai-Ouchi F, Inoue Y, Murakami K, Shoji I, Kawakami H, Matsuura Y, Lai MM, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: J Virol 巻: 83(10) ページ: 5137-47
• [雑誌論文] Hepatitis C virus nonstructural 4B protein modulates sterol regulatory element-binding protein signaling via the AKT pathway (2009)
  • 著者名/発表者名: Park CY, Jun HJ, Wakita T, Cheong JH, Hwang SB
  • 雑誌名: J Biol Chem 巻: 284(14) ページ: 9237-46
• [学会発表] Hepatitis C virus replication models and anti-viral development (2012)
  • 著者名/発表者名: T Wakita
  • 学会等名: The 1^<st> International Symposium on Latent TGF-beta Activation Reaction
  • 発表場所: RIKEN Kobe Inst, Ctr. For Delop Biol, Auditorium, Kobe
  • 年月日: 2012-02-25
• [学会発表] Hepatitis C virus replication in vitro and persistent infection in vivo : mechanistic analysis and antiviral development (2012)
  • 著者名/発表者名: T Wakita
  • 学会等名: Challenges to overcome Emerging Infectious Diseases in South-eastern Asia
  • 発表場所: Siran Kaikan, Kyoto Uninversity. Kyoto
  • 年月日: 2012-01-13
• [学会発表] Hepatitis C virus replication in vitro and persistent infection in vivo : mechanistic analysis and antiviral development (2011)
  • 著者名/発表者名: T Wakita
  • 学会等名: Singapore-Japan Forum on Emerging Concepts in Microbiology
  • 発表場所: National University of Singapore, Singapore
  • 年月日: 20111115-16
• [学会発表] HCV JFH-1キメラ株を用いたNS5a阻害剤の株特異的抗ウイルス活性の評価 (2011)
  • 著者名/発表者名: 加藤孝宣、政木隆博、脇田隆字
  • 学会等名: 第15回日本肝臓学会大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
  • 年月日: 20111020-21
• [学会発表] HCV JFH-1株のチンパンジー感染実験で得られた適応変異株の機能解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 鈴木哲朗、脇田隆字
  • 学会等名: 第15回日本肝臓学会大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
  • 年月日: 20111020-21
• [学会発表] HCV感染に伴う宿主細胞の脂質代謝の変化と代謝産物のメタボロミクス解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 相崎英樹、鈴木哲朗、脇田隆字
  • 学会等名: 第47回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: ホテルグランパシフィック
  • 年月日: 20110602-03
• [学会発表] HCV RNA replication and drug development (2011)
  • 著者名/発表者名: T Wakita
  • 学会等名: The 8th APASL Single Topic Conference Beijing
  • 発表場所: China
  • 年月日: 2011-10-07
• [学会発表] Hepatitis C Virus Infection and Replication, annual meeting of Prof (2011)
  • 著者名/発表者名: T Wakita
  • 学会等名: Juei-Low Sung's Research Foundation
  • 発表場所: Taipei, Taiwan
  • 年月日: 2011-08-06
• [学会発表] HCV replication in vitro, The 7th Single Topic Conference : Hepatitis C Virus (2010)
  • 著者名/発表者名: T Wakita
  • 学会等名: Asia Pacific Association of the Study of the Liver(APASL)
  • 発表場所: Makuhari Messe, Chiba, Japan
  • 年月日: 20101217-18
• [学会発表] ESCRT小胞輸送系のHCV産生への関与 (2010)
  • 著者名/発表者名: 有海康雄、黒木美沙緒、土方誠、Qi Yue、池田正徳、脇田隆字、下遠野邦忠、加藤宜之
  • 学会等名: 日本ウイルス学会第58回学術集会
  • 発表場所: あわぎんホール
  • 年月日: 20101107-09
• [学会発表] HCVの増殖適応変異とその意義 (2010)
  • 著者名/発表者名: 加藤孝宣、岡本有加、村山麻子、政木隆博、脇田隆字
  • 学会等名: 日本ウイルス学会第58回学術集会
  • 発表場所: あわぎんホール
  • 年月日: 20101107-09
• [学会発表] HCV replication and persistent infection, Cold Spring Harbor Asia Conference on Emerging Infectious Diseases : Emerging Viruses and the Control of Viruses (2010)
  • 著者名/発表者名: T Wakita
  • 学会等名: Cold Spring Harbor Asia Conference
  • 発表場所: Suzhou Dushu Lake Conference Center, Suzhou, China
  • 年月日: 20101018-22
• [学会発表] HCVNS5A蛋白のリン酸化に関与する新規セリン/スレオニンキナーゼの探索 (2010)
  • 著者名/発表者名: 政木隆博、松永智子、高橋宏隆、加藤孝宣、宮村達男、遠藤弥重太、澤崎達也、脇田隆字、鈴木哲朗
  • 学会等名: 第46回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: ホテルメトロポリタン山形
  • 年月日: 20100527-28
• [学会発表] HCV replication and virus particle formation in cell culture (2010)
  • 著者名/発表者名: T Wakita
  • 学会等名: International Symposium for Information Exchange in Bio Industry : Inflamation and Cancer : International Symposium on Current Insight into Prevalent Diseases
  • 発表場所: POSTECH Biotech Center, Pohang, Korea
  • 年月日: 2010-02-22
• [学会発表] HCV cell culture system and antiviral development. International Symposium on Hepatocellular Carcinoma (2010)
  • 著者名/発表者名: T Wakita
  • 学会等名: Kagoshima University Faculty of Medicine
  • 発表場所: Kagoshima, Japan
  • 年月日: 2010-02-19
• [学会発表] HCV粒子形成に関与する脂肪滴周辺膜蛋白の同定 (2009)
  • 著者名/発表者名: 相崎英樹、後藤耕司、山本真民、佐藤慈子、高橋信弘、深澤征義、花田賢太郎、松浦善治、宮村達男、脇田隆字、鈴木哲朗
  • 学会等名: 日本ウイルス学会第57回学術集会
  • 発表場所: 都市センターホテル
  • 年月日: 20091025-27
• [学会発表] C型肝炎ウイルスの感染粒子形成機構 (2009)
  • 著者名/発表者名: 鈴木哲朗、脇田隆字
  • 学会等名: 第13回日本肝臓学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館
  • 年月日: 20091014-16
• [学会発表] 肝炎ウイルス基礎研究 (2009)
  • 著者名/発表者名: 脇田隆字
  • 学会等名: 第45回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 神戸ポートピアホテル
  • 年月日: 20090604-05
• [学会発表] HCV cell culture system (2009)
  • 著者名/発表者名: T Wakita
  • 学会等名: Asian Pacific Digestive Week(APDW2009)
  • 発表場所: Taipei, Taiwan
  • 年月日: 2009-09-29