疾患特異的iPS細胞を用いた難治性小児骨髄異形成症候群の発症機構の解析

2010 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21390308
• 研究機関: 信州大学
• 研究代表者: 小池 健一 信州大学, 医学部, 教授 (40143979)
• 研究分担者: 塩原 正明 信州大学, 医学部, 准教授 (00293514) ; 坂下 一夫 信州大学, 医学部・附属病院, 助教 (10345746)
• キーワード: 骨髄異形成症候群 / iPS細胞 / 造血幹細胞

研究概要

Wellcome Trust Sanger Institute(UK)より供与されたOCT3/4、SOX2、c-MYC、KLF4、green fluorescent protein(GFP)のcDNAを含むトランスポゾン-プラスミドを用いて末梢血単核球にtransfectionを試みたが、CD19に対するキメラ抗原受容体(CAR)のtransfection効率は17-18%と低値であった。一方、レトロウイルスベクターを用いた場合、細胞核内の染色体に積極的に入り込んだり、あるいは染色体DNAと遺伝的組換えを起こす恐れがある。また、挿入近傍のがん遺伝子が活性化される可能性もある。このため、細胞核の中に入らず、細胞質内で自らのゲノムを複製して大量のタンパク質を作り出すセンダイウイルスベクターを用いてtransfectionを試みた。PTPN11遺伝子変異を有するJMML患者のCD34陽性細胞、T細胞に4遺伝子をtransfectし、放射線照射マウス胎児線維芽細胞をfeeder細胞として、20%knockout serum replacementと5ng/ml basic fibloblast growth factorを含むhuman ES mediumで培養したところ、iPS様細胞(CD34陰性、PTPN11遺伝子変異あり)が得られた。このiPS様細胞を10ng/mlのGM-CSFを添加したAGM細胞上で培養し、JMML患者のiPS様細胞がCD34陽性細胞へ分化し、増殖するか否かを検討している。
2009年にJMMLにおける新たな遺伝子異常として、CBL遺伝子変異が報告された。NRAS、KRAS、PTPN11遺伝子が野生型であり、神経線維腫症I型の臨床像を示さなかった12名のJMML患者において、CBL変異のスクリーニングを行ったところ、4名に変異が認められた。このうち、2例は、6-MPなどのnon-intensive化学療法のみで、15年～28年間血液学的改善が得られている。即ち、CBL変異を持つJMML患者の予後が必ずしも不良ではないことが明らかとなった。

研究成果

• [雑誌論文] Autoimmune lymphoproliferative syndrome-like disease with somatic KRAS mutation. (2011)
  • 著者名/発表者名: Takagi M, Matsuda K, Koike K, et, al.
  • 雑誌名: Blood 巻: 117 ページ: 2887-90
  • 査読あり
• [雑誌論文] Engraftment syndrome, but not acute graft-versus-host disease, younger age, CYP3A5 or MDR1 polymorphisms, increases tacrolimus clearance in pediatric hematopoietic stem cell transplantation. (2011)
  • 著者名/発表者名: Yanagisawa R, Katsuyama Y, Shigemura T, Saito S, Koike K, et, al.
  • 雑誌名: Bone Marrow Transplantation 巻: 2011 ページ: 90-7
  • 査読あり
• [雑誌論文] Disappearance of minimal residual disease after the early withdrawal of immunosuppressants in a patient with juvenile myelomonocytic leukemia. (2011)
  • 著者名/発表者名: Yanagisawa R Matsuda K, Koike K, et, al.
  • 雑誌名: Pediatr Blood Cancer 巻: 56 ページ: 501-2
  • 査読あり
• [雑誌論文] HDM2 impairs Noxa transcription and affects apoptotic cell death in a p53/p73-dependent manner in neuroblastoma. (2011)
  • 著者名/発表者名: Shi Y, Koike K, Kamijo T, et, al.
  • 雑誌名: Eur J Cancer 巻: 46 ページ: 2324-34
  • 査読あり
• [雑誌論文] Long-term survival after non-intensive chemotherapy in some juvenile myelomonocytic leukemia patients with CBL mutations, and the possible presence of normal individuals with the mutations (2010)
  • 著者名/発表者名: Matsuda K, Taira C, Sakashita K, Saito S, Tanaka-Yanagisawa M, Yanagisawa R, Nakazawa Y, Shiohara M, Fukushima K, Oda M, Honda T, Nakahata T, Koike K
  • 雑誌名: Blood 巻: 115 ページ: 5429-31
  • 査読あり
• [雑誌論文] Low toxicity of a conditioning with 8-Gy total body irradiation, fludarabine and cyclophosphamide as preparative regimen for allogeneic hematopoietic stem cell transplantation in pediatric hematological malignancies.Pediatric Transplantation, 2009 13: 737-45. (2010)
  • 著者名/発表者名: Hirabayashi K, Shiohara M, Koike K, et, al.
  • 雑誌名: Pediatr Blood Cancer 巻: 55 ページ: 202-5
  • 査読あり
• [学会発表] 教育セミナー小児科領域におけるITの活用 (2010)
  • 著者名/発表者名: 小池健一
  • 学会等名: 日本小児科学会
  • 発表場所: 盛岡市
  • 年月日: 2010-04-23