ヒト卵巣凍結の臨床応用に向けた基礎的検討～手術および凍結の技術革新～

2011 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21390455
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 久慈 直昭 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (80169987)
• 研究分担者: 鈴木 宏志 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (60333473) ; 柏崎 直巳 麻布大学, 獣医学部, 教授 (90298232)
• キーワード: 移植・再生医療 / 医療・福祉 / 再生医学

研究概要

本年度、卵巣および卵巣組織片の超低温保存法の開発を目的に、ブタ卵巣組織片およびマウス卵巣を、交流磁場を与えるCells Alive System(CAS)装置で凍結保存、小型卵胞の組織学的評価およびGAPDH遺伝子発現量の半定量化による分子生物学的評価を行うとともに、凍結したマウス卵巣をNOD-SCIDマウスに移植、妊孕性と胎児への影響を確認した。
1.ブタ卵巣組織片の凍結
凍結融解後のブタ卵巣組織の組織学的評価では、CAS処置による凍害保護効果は認められなかった。さらに凍結融解したブタ卵巣組織片におけるGAPDH遺伝子発現量の評価では,CAS処置の有無および凍害保護物質(DMSOとEG)の違いによる発現量の差は認められなかった。
2.マウス卵巣凍結に於けるCAS付加の影響
5週齢C57BL/6Jマウスから採取した卵巣をCAS付加・非付加の各条件下、1.4mol/L DMSOを用いた緩慢法にて凍結保存を行い、融解後、両側の卵巣の一部を摘出した8～12週齢のSCIDマウスの左右の卵巣嚢内に移植した。移植後、レシピエントの性周期の回復を確認後、3ヶ月齢以降の雄ICRマウスと交配させた。交配後、移植卵巣に由来する産仔が観察されたのはCAS+で4例(44%)、CAS-区では観察されなかった。さらに、CAS+区で得られた野生色を呈する雌雄のマウス1ペアの交配を試みた結果、8例の産仔を得た。以上、CAS条件下で凍結保存した卵巣は、移植後に生着し正常に機能することが示された。

研究成果

• [雑誌論文] In vitro maturation of canine oocytes co-cultured with bovine and canine granulosa cell monolayers (2011)
  • 著者名/発表者名: Abdel-Ghani, M., Shimizu, T., Asano, T. and Suzuki, H
  • 雑誌名: Theriogenology 巻: 77 ページ: 347-355
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effect of bovine cumulus-oocyte complexes-conditioned medium on in-vitro maturation of canine oocytes (2011)
  • 著者名/発表者名: Abdel-Ghani, M., Abe, Y., Asano, T., Hamano, S., Suzuki, H.
  • 雑誌名: Reprod.Med.Biol. 巻: 10 ページ: 43-49
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cryopreservation of canine embryos (2011)
  • 著者名/発表者名: Abe, Y., Suwa, Y., Asano, T., Ueta, Y.Y., Kobayashi, N., Ohshima, N., Shirasuna, S., Abdel-Ghani, M.A., Oi, M., Kobayashi, Y., Miyoshi, M., Miyahara, K., Suzuki, H.
  • 雑誌名: Biol.Reprod. 巻: 84 ページ: 363-368
  • 査読あり
• [雑誌論文] A study on freeze-drying as a method of preserving mouse sperm (2011)
  • 著者名/発表者名: Kawase, Y., Suzuki, H.
  • 雑誌名: J.Reprod.Dev. 巻: 57 ページ: 176-182
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effect of graft site and gonadotrophin treatment on follicular development of canine ovarian grafts transplanted to NOD-SCID mice (2011)
  • 著者名/発表者名: Abdel-Ghani, M., Abe, Y, Asano, T., Suzuki, H.
  • 雑誌名: Reprod.Med.Biol. 巻: 10 ページ: 259-266
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effect of intraperitoneal administration of desialylated erythropoietin on the follicular survival in cryopreserved canine ovaries after xenotransplantation (2011)
  • 著者名/発表者名: Hirayama, Y., Inoue, K., Suzuki, H.
  • 雑誌名: J.Mamm.Ova Res. 巻: 28 ページ: 143-147
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression of erythropoietic cytokines in alpha-tocopherol transfer protein knockout mice with murine malaria infection (2011)
  • 著者名/発表者名: Herbas, M.S., Ueta, Y.Y., Ishibashi, K., Suzuki, H.
  • 雑誌名: Parasitol.Res. 巻: 109 ページ: 1243-1250
  • 査読あり
• [雑誌論文] Seroepidemiological survey of Brucella canis infection in dogs in Japan using the tube agglutination test (2011)
  • 著者名/発表者名: Tachibana, M., Kobayashi, N., Inokuma, H., Suzuki, H., Watarai, M.
  • 雑誌名: J.Jpn.Vet.Med.Assoc. 巻: 64 ページ: 559-561
  • 査読あり
• [雑誌論文] Beneficial effect of hyperbaric oxygen therapy on the follicular survival of mouse ovary after transplantation (2011)
  • 著者名/発表者名: Hayashi, S., Asano, T., Kakizaki, R., Suzuki, H.
  • 雑誌名: J.Reprod.Dev. 巻: 58(In press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Scavenger receptor mediates systemic RNA interference in ticks (2011)
  • 著者名/発表者名: Aung, K.M., Boldbaatar, D., Umemiya-Shirafuji, R., Liao, M., Xuan, X., Suzuki, H., Galay, R.L., Tanaka, T., Fujisaki, K.
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 6(12) ページ: e28407
  • 査読あり
• [雑誌論文] 【不妊診療のすべて】ART(生殖補助医療)精子・卵子・卵巣の凍結保存とその安全性 (2011)
  • 著者名/発表者名: 久慈直昭(慶応義塾大学医学部産婦人科学), 井上治, 福永朝子, 菅原かな, 小川誠司, 奥村典子, 山田満稔, 浜谷敏生, 吉村泰典
  • 雑誌名: 産婦人科治療 巻: 102巻増刊 ページ: 495-500
• [学会発表] Puppies from frozen embryos (2011)
  • 著者名/発表者名: Suzuki, H
  • 学会等名: 第104回日本繁殖生物学会
  • 発表場所: いわて県民情報交流センター・アイーナ,盛岡(岩手県)
  • 年月日: 20110913-17
• [学会発表] Murine Plasmodium virulence is affected due to oxidative stress status of the host (2011)
  • 著者名/発表者名: Herbas, S. M., Maggloire, N. and Suzuki, H.
  • 学会等名: 17^<th> Japanese-German cooperative symposium on protozoan diseases
  • 発表場所: Nara Women's University, Nara
  • 年月日: 20110912-14
• [学会発表] Cryopreservation of canine embryos (2011)
  • 著者名/発表者名: Suzuki, H.
  • 学会等名: the 12th International Congress on Reproductive Biomedicine
  • 発表場所: Royan Institute, Tehran, The Islamic Republic of Iran(招聘講演)
  • 年月日: 20110907-20110909
• [学会発表] Follicular loss of cryopreserved canine ovary after xenotransplantation and its solution (2011)
  • 著者名/発表者名: Suzuki, H.
  • 学会等名: the 12th International Congress on Reproductive Biomedicine
  • 発表場所: Royan Institute, Tehran, The Islamic Republic of Iran(招聘講演)
  • 年月日: 20110907-20110909
• [学会発表] Effect of hyperbaric oxygen therapy on the follicular loss of ovarian tissues after transplantation (2011)
  • 著者名/発表者名: Suzuki. H., Hayashi, S., Asano, T.
  • 学会等名: 44th Annual Meeting of the Society for the Study of Reproduction
  • 発表場所: Portland, Oregon, USA(招聘講演)
  • 年月日: 20110731-20110804
• [学会発表] マウスの卵巣移植における高圧酸素療法の卵胞数減少抑制効果について (2011)
  • 著者名/発表者名: Hayashi, S., Asano, T. and Suzuki, H.
  • 学会等名: 第52回日本哺乳動物卵子学会
  • 発表場所: 国際医療福祉大学本校
  • 年月日: 20110521-22
• [学会発表] X、Y精子選別によるイヌの雌雄産み分け技術の開発-FISH法によるイヌ精子の性判別法の確立- (2011)
  • 著者名/発表者名: Oi, M., Yamada, K., Hayakawa, H. and Suzuki, H.
  • 学会等名: 第26回動物生殖工学研究会
  • 発表場所: 北里本館,東京
  • 年月日: 2011-12-04
• [学会発表] 盲導犬適性と性格関連遺伝子多型との関連性 (2011)
  • 著者名/発表者名: Ohshima, N., Kobayashi, N., Shirasuna, S., Suwa, Y. and Suzuki, H.
  • 学会等名: 北海道実験動物研究会・日本実験動物技術者協会北海道支部合同学術集会
  • 発表場所: 北海道大学(北海道)
  • 年月日: 2011-07-09
• [学会発表] マウスの卵巣移植における高圧酸素療法の効果 (2011)
  • 著者名/発表者名: Hayashi, S., Asano, T. and Suzuki, H.
  • 学会等名: 北海道実験動物研究会・日本実験動物技術者協会北海道支部合同学術集会
  • 発表場所: 北海道大学(北海道)
  • 年月日: 2011-07-09