| 研究概要 |
ヒト単球様細胞THP-1(理研細胞銀行)をフォルボースエステル誘導することによってマクロファージに分化させ、銅イオンやTEGDMAモノマーによる細胞傷害性を多面的に評価した。具体的な研究成果は下記の通りであった。
(1)50-500μM塩化銅(II)を培地中へ添加し、経時的にMTSアッセイを行って細胞生存率を調べるとともに、24時間後には透過型電子顕微鏡による観察とCaspase3の活性測定を行った。1時間後と3時間後には、マイクロアレイによってmicroRNAの発現を解析した。その結果、300μM以上の塩化銅(II)存在下では、細胞生存率が有意に低下したが、Caspase3活性の有意な上昇はなかった。この時、細胞突起は消失して小胞体が膨張し、ミトコンドリアが破壊される水腫様変性像が多数認められた。塩化銅(II)添加3時間後には、let-7a,let-7b,let-7e,let-7f,miR-1等32のmicroRNAが1.5倍以上発現上昇した。300μM以上の塩化銅(II)では、let-7ファミリーをはじめとする多くのmicroRNAが関与して、マクロファージはネクローシスへ向かう可能性が示唆された。これらのmicroRNAは銅イオンの細胞内輸送に深く関与していると類推された。
(2)異物代謝酵素遺伝子はIC50濃度(500μM)のTEGDMAモノマーを分解し、アルデヒドを介してアルコール分解物の生成にまで至ったと考えられた。TEGDMAとグルタチオンの抱合も考えられた。抗酸化ストレス遺伝子は過酸化脂質の還元等を行うと考えられた。グルタチオンの欠乏は抗酸化ストレス能力を低下させ、細胞障害に繋がると考えられた。TEGDMAの小さな起炎性はNF-κB経路ではなくMAPK経路によると考えられた。これらの酸化ストレスは遷移金属イオンに暴露されたマクロファージにも生じていると類推された。
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