研究課題
電子顕微鏡を用いた定量的な分子局在解析は、高い空間解像度を持ち、生理学的機能計測法と組み合わせることにより、細胞レベルの現象を分子生物学的に理解するために必須な知見を提供できる。中でもSDS-digested freeze-fracture replica labeling method (SDS-FRL法)は、2次元的に広がる細胞膜上の分子局在を定量的に解析することが出来、既存法の欠点を補完できることを示してきた。しかし現状では、幾つかの技術的制約によりその適用範囲は狭い。そこで本研究では、SDS-FRL法の技術基盤の強化を行い、より多種の分子に対応できる技術にする。1)凍結組織割断時の分子分配様式の解析分子生物学的解析で広く用いられているペプチド配列タグFLAGと緑色蛍光タンパク質(GFP)を細胞内外に持つレポーター分子を発現する遺伝子改変マウスを作製し、有用な系統を選出した。2)凍結割断レプリカ膜で複製された細胞質側脂質膜面(P-face)の分子定量性の向上。上記動物を用いて、特異的な反応の得られる抗体を選別し、更にa)SDS処理条件と、b)抗原賦活化の前処理、c)ブロッキング、d)抗体反応条件をさいてきかし検討した。
すべて 2010
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