| 研究概要 |
本研究では,好アルカリ性細菌J813株が生産するキチナーゼ(ChiJ)に含まれるフィブロネクチンタイプIII様ドメイン(FnIIID)やキチン結合ドメイン(ChBD)といった付加ドメインを用い,キチンを基盤とする新規細胞培養用人工マトリックスの創製を目指す。平成21年度は,FnIIID/ChBD領域ないしChBD領域に対してRGD配列を導入した各種組換えタンパク質を調製し,それらがインテグリンと相互作用すること,そして各種組換えタンパク質を固定化した培養フラスコにマウス繊維芽細胞が接着可能であることを明らかにした。平成22年度は,上で調製した組換えタンパク質を固定化した培養フラスコ上に,マウス由来のモデル細胞だけでなく,ヒト繊維芽細胞も接着可能であること,そしてその細胞接着がインテグリンを介したものであることを明らかにした。さらに,RGD配列を付加したFnIIID/ChBDおよびChBD組換えタンパク質に対し,さらにPHSRN配列の導入を試みた。その際,同時にさらに多くのRGD配列の導入も試みた。大腸菌が生産した各種組換えタンパク質の精製を行い,キチンへの結合能ならびにマウス繊維芽細胞接着能を調べた。その結果,一部の組換えタンパク質においては,RGD配列およびPHSRN配列の導入により不溶性キチン結合能を失うことがわかった。一方で,FnIIID/ChBDのN末端およびC末端にRGD配列を導入し,さらにFnIIID領域の内部にRGD配列およびPHSRN配列を導入した組換えタンパク質R-F(P,R')/B-Rが,キチン結合能と高いマウス繊維芽細胞接着能を有することが明らかとなった。
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