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平成21年度に構築した酢酸を分解する嫌気性連続培養系を微生物試料として、蛍光in situハイブリダイゼーション実験を行い、連続培養系内に糸状および凝集塊を形成する古細菌が優占することを確認し、細胞形状からそれぞれMethanosaeta属およびMethanosarcina属の酢酸資化性メタン生成古細菌と推定した。また水素資化性メタン生成古細菌をF_420自家蛍光法により顕微鏡下で検出した結果、短桿菌状の細胞が検出された。古細菌および細菌の16S rRNA遺伝子をPCR法により増幅し、系統解析のための実験手順を構築した。
昨年度に引き続き、96-wellマイクロプレートを用いた嫌気培養法の最適化を行った。(1)培地中の還元剤(システイン塩酸塩および硫化ナトリウム)濃度、(2)マイクロプレートの材質、(3)マイクロプレートのシール材をそれぞれ検討することで、嫌気性指示薬であるレサズリンの赤色化を少なくとも2週間以上防止する嫌気環境を達成することができた。最適化した嫌気培養法を用いて、酢酸を分解する嫌気性連続培養系に含まれる微生物群集の分離培養を行った。約2週間の培養の結果、1 wellあたり約3個の細胞の分配が予想されるマイクロプレートで高い自家蛍光示すwellがいくつか検出された。それらのwell中の培養液から細菌の16S rRNA遺伝子がPCR法により増幅した。以上の結果から、水素資化性メタン生成古細菌と酢酸酸化細菌による酢酸代謝微生物共生系が分離された可能性が示唆された。
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