バキュロウイルス時間差多重感染による糖鎖修飾ライブラリー構築システムの開発

2011 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 21510220
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 生物分子科学
• 研究機関: 秋田大学
• 研究代表者: 後藤 猛 秋田大学, 大学院・工学資源学研究科, 教授 (10215494)
• 研究期間 (年度): 2009 – 2011
• キーワード: 生物活性分子の設計 / 合成 / 糖鎖化学

研究概要

糖転移酵素を昆虫細胞内に時間差発現させることによるタンパク質の糖鎖修飾システムを構築するために,早期発現型のgp64プロモーターの下流に糖転移酵素の可溶性ドメインの遺伝子を導入した複数の組換えバキュロウイルスを作成した。さらに,組換えバキュロウイルスを昆虫細胞に感染させて組換えタンパク質を生産する際にしばしば問題となるプロテアーゼ分解について,これを安価で効率的に抑制する方法を開発した。

研究成果

• [雑誌論文] Purification and characterization of aspartic protease derived from Sf9 insect cells (2010)
  • 著者名/発表者名: Gotoh, T., Ono, H., Kikuchi, K.-I., Nirasawa, S. Takahashi, S
  • 雑誌名: Biosci. Biotechnol. Biochem 巻: 74(10) ページ: 2154-2157
• [雑誌論文] Active human renin production using a baculovirus expression vector system : An effective method for preventing excessive proteolytic degradation of recombinant proteins (2010)
  • 著者名/発表者名: Gotoh, T., Kikuchi, K.-I., Takahashi, S
  • 雑誌名: J. Chem. Eng. Jpn 巻: 43(7) ページ: 603-607
• [雑誌論文] Prorenin processing enzyme (PPE) produced by baculovirus-infected Sf-9 insect cells : PPE is the cysteine protease encoded in the AcMNPV gene (2010)
  • 著者名/発表者名: Gotoh, T., Awa, H., Kikuchi, K.-I., Nirasawa, S., Takahashi, S
  • 雑誌名: Biosci. Biotechnol. Biochem 巻: 74(2) ページ: 370-374
• [雑誌論文] Expression and in situ processing of human prorenin to active renin in baculovirus-infected Sf-9 insect cell cultures under several infective conditions (2009)
  • 著者名/発表者名: Gotoh, T., Awa, H., Kikuchi, K.-I., Takahashi, S
  • 雑誌名: Biochem. Eng. J 巻: 43(2) ページ: 216-220
• [学会発表] バキュロウイルス感染Sf9昆虫細胞によるヒトインターロイキン-2生産と糖鎖構造解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 進藤祐宜, 後藤猛, 菊地賢一
  • 学会等名: 化学工学会第76年会
  • 発表場所: 東京農工大学(東京)
  • 年月日: 20110322-24
• [学会発表] バキュロウイルス感染Sf9昆虫細胞によるヒトインターロイキン-2の生産 (2011)
  • 著者名/発表者名: 進藤祐宜, 後藤猛, 菊地賢一
  • 学会等名: 秋田応用生命科学研究会講演会
  • 発表場所: 秋田県総合食品研究センター(秋田)
  • 年月日: 2011-05-27
• [学会発表] Optimization of soluble human interleukin-2 production in E. coli with coexpression of molecular chaperons in the cold induced system (2010)
  • 著者名/発表者名: Gotoh, T., Horii, I., Kikuchi, K.-I
  • 学会等名: 14th International Biotechnology Symposium and Exhibition
  • 発表場所: Palacongressi (Rimini, Italy)
  • 年月日: 20100914-18
• [学会発表] 昆虫細胞-バキュロウイルス発現におけるアスパルティックプロテアーゼについて (2010)
  • 著者名/発表者名: 小野洋輝, 後藤猛, 菊地賢一, 韮澤悟, 高橋砂織
  • 学会等名: 第76回日本生化学会東北支部例会
  • 発表場所: コラッセふくしま(福島)
  • 年月日: 2010-05-08
• [学会発表] Sf-9昆虫細胞-バキュロウイルス発現系由来アスパルティックプロテアーゼ(SAP)の特性解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 小野洋輝, 後藤猛, 菊地賢一, 韮澤悟, 高橋砂織
  • 学会等名: 秋田化学技術協会講演会
  • 発表場所: 秋田大学(秋田)
  • 年月日: 2010-03-05
• [学会発表] Expression of recombinant human (rh)-renin in Sf-9 insect cells : Application of rh-renin for inhibitor screening (2009)
  • 著者名/発表者名: Takahashi, S., Hori, K., Hiwatashi, K., Awa, H., Kikuchi, K.-I., Gotoh, T
  • 学会等名: 6th General Meeting of the International Proteolysis Society
  • 発表場所: Marriot Hotel (Surfers Paradise, QLD Australia)
  • 年月日: 20091026-30
• [学会発表] Characterization of prorenin processing enzyme responsible for in situ active human renin production by baculovirus-infected Sf-9 cells and inhibition of excessive processing (2009)
  • 著者名/発表者名: Gotoh, T., Awa, H., Hikage, S., Kikuchi, K.-I., Takahashi, S
  • 学会等名: 14th European Congress on Biotechnology
  • 発表場所: Palau de Congressos de Catalunya (Barcelona, Spain)
  • 年月日: 20090913-16
• [学会発表] Direct production of active human renin by baculovirus-infected Sf-9 insect cell culture (2009)
  • 著者名/発表者名: Gotoh, T., Awa, H., Kikuchi, K.-I., Takahashi, S
  • 学会等名: 8th World Congress of Chemical Engineering
  • 発表場所: Palais des Congres de Montreal (Montreal, Canada)
  • 年月日: 20090823-27
• [学会発表] バキュロウイルス感染Sf-9昆虫細胞培養系におけるキチナーゼの発現 (2009)
  • 著者名/発表者名: 高橋砂織, 樋渡一之, 菊地賢一, 後藤猛
  • 学会等名: 第23回キチンキトサンシンポジウム
  • 発表場所: 佐賀大学(佐賀)
  • 年月日: 20090820-21
• [学会発表] バキュロウイルス感染Sf-9昆虫細胞培養におけるプロレニンプロセッシング酵素の特性とレニン過剰分解の抑制 (2009)
  • 著者名/発表者名: 後藤猛, 安和広乃, 日景翔輝, 菊地賢一, 韮澤悟, 高橋砂織
  • 学会等名: 第9回食品酵素化学研究会・第15回
  • 発表場所: 秋田県総合食品研究センター(秋田)
  • 年月日: 2009-09-04
• [学会発表] Sf-9昆虫細胞におけるプロレニンの発現とプロレニンプロセッシング酵素の動態 (2009)
  • 著者名/発表者名: 安和広乃, 後藤猛, 菊地賢一, 韮澤悟, 樋渡一之, 堀一之, 高橋砂織
  • 学会等名: 日本生化学会東北支部第75回例会・シンポジウム
  • 発表場所: 東北大学(仙台)
  • 年月日: 2009-05-09