| 研究概要 |
本研究では,タンパク質・遺伝子の配列情報を必要とせず,短時間に酵素遺伝子が同定できる,機能発現スクリーニング法を用いて植物二次代謝産物の生合成酵素遺伝子の同定を行う.
プテロカルパン生合成:マメ科植物のファイトアレキシンの多くはプテロカルパン骨格を持つ.生合成系の前半の酵素遺伝子はほとんど同定されたが,これまでのところプテロカルパン生合成の最終酵素(脱水酵素)遺伝子は未同定である.Isoflavone 2'-hydroxylase,isoflavone reductase,vestitone reductase cDNAを取得し,組換え酵母や大腸菌を用いて2'-hydroxyformononetinから脱水酵素の基質(7,2'-dihydroxy-4'-O-methoxyisoflavanol)を調製した.今後エリシター処理したカンゾウcDNAライブラリーを用いて脱水酵素cDNAを同定する予定である.
非マメ科植物のイソフラボノイド生合成:イソフラボノイドは主にマメ科植物に分布するが,非マメ科植物のアヤメ属植物もイソフラボノイドを蓄積する.しかしこれまで非マメ科植物のイソフラボノイドの生合成機構は不明である.イソフラボノイドを蓄積するIris germanica(アヤメ属)不定根からcDNAライブラリーを作成した.酵母系を用いた発現スクリーニングにより,イソフラボノイド骨格合成酵素cDNAを取得した.
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