| 研究課題/領域番号 |
21560195
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| 研究機関 | 防衛大学校(総合教育学群、人文社会科学群、応用科学 |
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研究代表者 |
多田 茂 防衛大学校(総合教育学群、人文社会科学群、応用科学, 応用科学群, 准教授 (70251650)
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| 研究分担者 |
工藤 奨 芝浦工業大学, 工学部, 准教授 (70306926)
一宮 浩一 山梨大学, 医学工学総合研究部, 教授 (30037923)
鳥山 孝司 山梨大学, 医学工学総合研究部, 助教 (50313789)
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| キーワード | 動脈硬化症 / 一酸化窒素 / 血管内皮細胞 / せん断応力 / 血管壁伸張 |
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| 研究概要 |
せん断応力・壁伸張といった『力学的刺激』と血管細胞・組織における『機能異変』との生理学的関係の解明を行うため、本年度はウシ内皮細胞に流体力学的せん断応力を負荷し、そのときに産生される一酸化窒素(NO)と細胞内カルシウムイオン濃度の変化を共焦点レーザー顕微鏡を用いたバイオイメージング法により観察を行った。
実験はまず、内皮細胞を培養した石英板サンプルを準備し、このサンプルに蛍光染料を負荷した後、せん断応力負荷装置にセットし、一定時間せん断応力を負荷後、イメージング観察を行った。同時にNO合成酵素(NOS)について、内皮細胞型(eNOS)と誘導型(iNOS)の発現機構のせん断応力依存性について詳細に調べるため、ウェスタンブロットとELISAを行った。
内皮細胞のNO産生能については従来知られている通り、せん断応力負荷開始から数秒でNO産生がバイオイメージング法により確認された。カルシウムイオン濃度も同様に、せん断応力負荷後、早い時間で上昇が見られた。そのカルシウムイオンの由来を明確にするため、細胞表面のイオンチャネルをガドリニウムでブロックし、同様の実験を行ったところ、NO、カルシウムともに殆ど変化は見られなかったとことから、カルシウムは細胞内由来であると結論された。NOの由来についてはウェスタンブロット、ELISA法によりeNOS由来であることが確認されたが、iNOSについては数時間オーダーのせん断応力負荷が必要であることも、転写因子NF-kBの発現を調べる事により予想された。
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