ホスファチジルセリン代謝異常は哺乳細胞のオートファジーを誘導するか?

2011 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21570155
• 研究機関: 国立感染症研究所
• 研究代表者: 谷田 以誠 国立感染症研究所, 細胞化学部, 室長 (30296868)
• キーワード: オートファジー / タンパク分解 / ホスファチジルセリン / LC3 / ATG / PSS1 / PSS2

研究概要

哺乳細胞におけるホスファチジルセリン合成異常とオートファジーおよびオートファジー性細胞死との関係性を明らかにするために、本研究では、ボスファチジルセリン合成異常変異CHO株を用いて、オートファジーの誘導と、その時のオートファジーはオートファジー性細胞死かどうか?について研究を続けている。ホスファチジルセリン合成異常変異CHO細胞株を用いた解析から、細胞死に至るまでにオートファジーが細胞保護的に働いている事が考えられた。そこでヒト肝細胞由来のHuh7細胞を用いて、ヒトホスファチジルセリン合成酵素(PSS1)のノックダウンをおこなう事を計画した。PSS1のmiRNAノックダウンベクターを作成して、そのノックダウンの効果を調べたところ、リコンビナントPSS1の一過的な発現はよく抑制した。そこで、このベクターをもちいて、細胞内のPSS1のタンパク質レベルの低下を検討した。しかしながら、PSS1抗体で内在性PSS1の検出がうまくいかず、ノックダウンにより、内在性PSS1のタンパク質レベルの低下が起こっているかどうかが判断できなかった。このノックダウンの系が一過的なノックダウンの系であるために、細胞死が先に起こってしまい、それが選択圧となって、うまく検出できなかった可能性を考え、Tet-ONシステムを導入したノックダウン細胞のクローニングを検討している。またノックダウンの際にPSS2がアップレギュレーションを受けてる可能性を考えてPSS2の検出を同時に検討する必要がある。

研究成果

• [雑誌論文] The FAP motif within human ATG7, an autophagy-related E1-like enzyme, is essential for the E2-substrate reaction of LC3 lipidation (2012)
  • 著者名/発表者名: Tanida I, Yamasaki M, Komatsu M, Ueno T.
  • 雑誌名: Autophagy 巻: 8 ページ: 88-97
  • DOI: DOI:10.4161/auto.8.1.18339
  • 査読あり
• [雑誌論文] Doxorubicin-induced glomerulosclerosis with proteinuria in GFP-GABARAP transgenic mice (2012)
  • 著者名/発表者名: Takagi-Akiba M, Asanuma K, Tanida I, Tada N, Oliva Trejo JA, Nonaka K, Asanuma E, Kominami E, Ueno T, Tomino Y.
  • 雑誌名: Am J Physiol Renal Physiol 巻: 302 ページ: F380-9
  • DOI: DOI:10.1152/ajprenal.00502.2010
  • 査読あり
• [雑誌論文] Hepatic steatosis inhibits autophagic proteolysis via impairment of autophagosomal acidification and cathepsin expression (2011)
  • 著者名/発表者名: Inami Y, Yamashina S, Izumi K, Ueno T, Tanida I, Ikejima K, Watanabe S.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 412 ページ: 618-25
  • DOI: DOI:10.1016/j.bbrc.2011.08.012
  • 査読あり
• [雑誌論文] Liver autophagy contributes to the maintenance of blood glucose and a mino acid levels (2011)
  • 著者名/発表者名: Ezaki, et al
  • 雑誌名: Autoohagy 巻: 7 ページ: 727-736
  • DOI: 10.4161/auto.7.7.15371
  • 査読あり
• [学会発表] Ubiquitin modifies an autophagic modifier to inhibit ALIPS formation (2012)
  • 著者名/発表者名: I.Tanida
  • 学会等名: Gordon Research Conference 2012 "Autophagy In Stress
  • 発表場所: ベンチュラ(米国・カリフォルニア)
  • 年月日: 20120311-20120316
• [学会発表] 新奇構造体ALIPS形成抑制のためのユビキチン・プロテアソームによるATG12分解制御 (2011)
  • 著者名/発表者名: 谷田以誠, ら
  • 学会等名: 日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2011-12-15
• [備考]
  • URL: http://www.nih.go.jp/niid/ja/from-biochem/931-2nd.html