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我々のグループはリゾリン脂質の一つであるリゾホスファチジルイノシトール(LPI)が、カンナビノイド受容体の一つとして報告されたオーファンGPCRのGPR55にアゴニストとして作用することを発見した。LPIの構造活性相関を検討した結果、グリセロールのsn-2位にアラキドン酸を持つLPI(2-arachinony1-sn-glycero-3-phosphoinositol)が最も活性が強いことを見いだした。ホスファチジルイノシトール(PI)の構成脂肪酸は特徴的で、sn-1位にステアリン酸、sn-2位にアラキドン酸を持つものが多く存在する。sn-2位にアラキドン酸を持つLPIは、PIがホスホリパーゼA1 (PLA1)の作用を受けたときに生じることが考えられる。しかし、PLA1に関する研究は非常に限られており、また、PIを基質とするPLA1はほとんど知られていない。細胞内型PLA1としては、DDHD domain containing 1 (DDHD1)などが、NCBIデータベースに登録されている。DDHD1は、ホスファチジン酸(PA)-preferential PLA1 (PA-PLA1)として同定された酵素であるが、その真の生理的な意義は明らかになっていない。本研究は、LPIの産生に関与するPLA1の解明の手掛かりを得るべく、DDHD1の性状・機能を再評価した。
FLAG-DDHD1発現プラスミドをHEK293細胞に導入し安定発現細胞(FLAG-DDHD1/HEK293)を樹立した。この細胞を材料として、抗FLAG抗体カラムを用いて、FLAG-DDHD1を均一に精製した。
精製酵素は、PAのみならずPIも基質とした。切断される脂肪酸のグリセロール位置特異性を検討すると、PIのsn-1位の脂肪酸を特異的に切断し、2-アシル型LPIを産生した。
精製FLAG-DDHD1のPI-PLA1活性は、PAの添加により顕著に活性化された。また、精製FLAG-DDHD1はPAに対する結合活性を持っていた。PAがこの酵素の活性化因子として働いていることが考えられた。このことは、DDHD1発現細胞の刺激に応答したLPI産生の結果とよく一致していた。
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