研究課題
VaultはRNAタンパク質複合体で、その発現量と多剤耐性癌細胞における治療抵抗性との相関が指摘されている。この複合体は、major vault protein (MVP)、telomerase-associated protein 1 (TEP1)およびvault poly (ADP-ribose) polymerase (VPARP)の3種類のタンパク質と1種類のRNA分子から構成されているが、vault自体の機能については未だ不明な点が多い。これまでにMVPは、アドリアマイシン(ADM)やエトポシドなどのDNA傷害性薬剤により発現が亢進することが報告されている。そこで、本研究では、抗癌剤で誘導されるMVPの発現亢進機構について解析を行った。培地にADMを加えてヒト大腸癌細胞株SW-620を培養し、イムノブロット法およびRT-PCR法、real time PCR法を用いてMVP発現量を調べた。また、MVPプロモーター活性の変化はルシフェラーゼアッセイにより解析した。さらに、MVP発現を制御する転写因子の同定は標的転写因子特異的なsiRNAを用いてその転写因子をknockdown後、ADM処理下で培養し、イムノブロット法によりMVP発現量の変化を調べた。ヒト大腸癌細胞株SW-620におけるMVP mRNAとMVPタンパク質の発現はADMにより誘導された。また、ADMにより、約2倍のプロモーター活性の上昇が認められた。さらに、ADMによって誘導されるMVPの発現はSp1をknockdownすることにより抑制された。MVPのプロモーター領域には、Ybox、MyoD、GATA、E box、Sp1、p53およびStatの7個の転写因子結合モチーフが確認されている。今回の研究で、ADMによって誘導されるMVPは、Sp1によりその発現が制御されていることが判明した。
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