| 研究課題/領域番号 |
21590203
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
村上 志津子 順天堂大学, 医学部, 助教 (20255649)
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| 研究分担者 |
小池 正人 順天堂大学, 医学部, 准教授 (80347210)
佐々木 光穂 順天堂大学, 医学部, 助教 (20432536)
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| キーワード | GnRHニューロン / 軸索ガイダンス分子 / セマフォリン3A / ニューロピリン1 / ニワトリ胚 / コラーゲンゲル3次元培養 |
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| 研究概要 |
GnRH(生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン)産生ニューロンは脳の外の鼻プラコードで発生し脳内へ移動する。本研究は、GnRHニューロンの移動における反発性の軸索ガイダンス分子セマフォリン(Sema)3Aの役割の解明を目指す。本年度は1) ニワトリ胚では、Sema3Aは脳内でGnRHニューロンが移動方向を腹側に転換する部位である中隔背側部に局所的に発現し、GnRHニューロンがSema3A受容体(ニューロピリン1)を発現する(昨年度報告)こと、即ち、Sema3AがGnRHニューロンに対し反発性に働くことを実験的に検証した。2)GnRHニューロンを含む脳組織片とSema3A強制発現細胞塊とのコラーゲンゲル共培養系を用いてGnRHニューロンの移動能に対するSema3Aの効果を調べた。孵卵7.5日胚の前脳から中隔背側部のみを含んだ組織小片を切り出し、Sema3A強制発現細胞塊とともにマトリゲルを含むコラーゲンゲルに埋め込み、無血清培地(Neurobasal+B27)にて3日間培養した。その結果、3)対照群と比べると、Sema3A発現細胞塊との共培養では組織片から培地に移動したGnRHニューロンはほとんど見られず、突起伸長も抑制されていた。Sema3AによるGnRHニューロンの移動抑制について、GnRHニューロン自身に対する阻害効果なのか、ガイド構造となる神経線維の伸長抑制による二次的効果なのかを知るために、神経線維特異的抗体を用いて組織片から伸長する神経突起とGnRHニューロンとの相互関係を調べる必要がある。また、GnRHニューロンに対するSema3Aの移動抑制効果はニューロピリン1受容体を介するかどうかを調べるために、ニューロピリン1抗体を用いた抗体中和実験を行う予定である。
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