活性化血小板膜リン脂質上の凝固系活性化開始機構のイメージング解析

2011 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21590230
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 浦野 哲盟 浜松医科大学, 医学部, 教授 (50193967)
• 研究分担者: 鈴木 優子 浜松医科大学, 医学部, 准教授 (20345812)
• キーワード: 血液凝固 / 血液レオロジー / 線溶

研究概要

【1】ex-vivoにおける活性化血小板上のphosphatidylserine(PS)露出調節機構の解明と組織因子(Tissue Factor : TF)発現micro-particle集積の解析検討
in-vivoにおける血小板血栓形成の解析において血小板血栓の中央部の血小板のみにPS発現が認められた事実より、活性化血小板上へのphosphatidylserine(PS)の露出に及ぼすfibrin network形成の影響を共焦点顕微鏡を用いて検討した。血小板数を調節した多血小板血漿に蛍光標識fibrinogen(fbg)を加え、TF+カルシウムイオン、あるいはトロンビンで刺激することにより、フィブリン網形成とPS発現を時空間的に解析した。いずれの刺激でもPSの発現とフィブリン網の形成が観察できた。フィブリン網に結合した血小板の細胞内Ca^<++>濃度は、PS露出に先行して増加した。血小板とフィブリン網の結合を阻害するGPIIB/IIIa拮抗薬、フィブリン重合を阻害するGly-Pro-Arg-Proペプチド、更には血小板骨格の再構築を抑制するcytochalasin BによりPS発現は減弱した。PS発現には血小板がフィブリン骨格に結合し、結合血小板の骨格変化に伴う血餅退縮による機械的刺激が必須である事実が明らかになった。成果をまとめ論文投稿中である。
U937単球系培養細胞をCalcium ionophoreで刺激しTF発現microparticleを得た。上記と同様の系にmicroparticleを添加後フィブリン網が形成される事実が明らかになり、凝固系活性化の起点となりうると考えられた。TF、FVIIaとPS発現血小板の局在を解析中である。
【2】in-vivoにおける活性化血小板上へのTF-FVIIa集積の解析
in-vivoにおいてレーザー照射後の血栓中に蛍光標識FVIIaと蛍光標識可溶性TFが集積する事実を認めた。PS発現の局在との一致性を確認中である。

研究成果

• [雑誌論文] In vivo imaging visualizes discoid platelet aggregations without endothelium disruption and implicates contribution of inflammatory cyokine and integrin signaling (2012)
  • 著者名/発表者名: Nishimura S, Manabe I, Nagasaki M, Kakuta S, Iwakura Y, Takayama N, Ooehara J, Otsu M, Kamiya A, Petrich B, Urano T, Kadono T, Sato S, Aiba A, Yamashita H, Sugiura S, Kadowaki T, Nakauchi H, Eto K, Nagai R
  • 雑誌名: Blood 巻: 119(8) ページ: e45
  • DOI: 10.1182/blood-2011-09-381400
  • 査読あり
• [雑誌論文] PAI-1, progress in understanding the clinical problem and its aetiology (2012)
  • 著者名/発表者名: Iwaki T, Urano T, Umemura K
  • 雑誌名: British Journal of Haematology 巻: (In press)
  • DOI: 10.1111/j.1365-2141.2012.09074.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Surface-retained tPA is essential for effective fibrinolysis on vascular endothelial cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Suzuki Y, Yasui Y, Brzoska T, Mogami H, Urano T
  • 雑誌名: Blood 巻: 118(11) ページ: 3182-3185
• [雑誌論文] 線溶系検査の意味するところ (2011)
  • 著者名/発表者名: 浦野哲盟, 鈴木優子
  • 雑誌名: 臨床病理 巻: 59(7) ページ: 703-708
• [雑誌論文] 血栓形成の分子機構:凝固に伴い線溶活性が増強する機構 (2011)
  • 著者名/発表者名: 浦野哲盟
  • 雑誌名: Thrombosis Medicine 巻: 1(1) ページ: 89-92
• [雑誌論文] 血栓形成の分子機構:組織因子の構造変化と凝固活性発現調節 (2011)
  • 著者名/発表者名: 浦野哲盟
  • 雑誌名: Thrombosis Medicine 巻: 1(1) ページ: 89-92
• [雑誌論文] 線溶機序 (2011)
  • 著者名/発表者名: 浦野哲盟
  • 雑誌名: 脈管学 巻: 51(3) ページ: 293-299
• [学会発表] Real time imaging of plasminogen binding to micro-thrombus in vivo (2011)
  • 著者名/発表者名: Urano T, Tanaka A, Brzoska T, Mogami H, Suzuki Y
  • 学会等名: 第19回血管生物医学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 20111208-20111210
• [学会発表] Membrane-retained secreted tPA triggers cell-associated fibrinolysis on vascular endothelial cells.血管内皮細胞における細胞表面滞留tPAによる新たな細胞表面線溶活性発現調節機構 (2011)
  • 著者名/発表者名: Urano T, Suzuki Y
  • 学会等名: 第89回日本生理学会
  • 発表場所: 松本
  • 年月日: 20111208-20111210
• [学会発表] 血管内皮細胞表面における線溶酵素活性発現-増幅機構 (2011)
  • 著者名/発表者名: 浦野哲盟, 鈴木優子
  • 学会等名: 第16回日本病態プロテアーゼ学会学術集会
  • 発表場所: 大阪千里ライフサイエンスセンター
  • 年月日: 20110826-20110827
• [学会発表] PAI-1 deficiency in humans and mice (2011)
  • 著者名/発表者名: T.Iwaki, T.Kobayashi, K.Umemura, T.Urano, T.Kojima, N.Knayama
  • 学会等名: XXIIIth Congress of the International Society on Thrombosis and Haemostasis
  • 発表場所: Kyoto
  • 年月日: 20110723-20110728
• [学会発表] Spontaneous plasma clot lysis time assay revealed the importance of "coagulation-associated enhancement of fibrinolysis" (2011)
  • 著者名/発表者名: Urano T, Brzoska T, Suzuki Y
  • 学会等名: XXIIIth Congress of the International Society on Thrombosis and Haemostasis
  • 発表場所: Kyoto
  • 年月日: 20110723-20110728
• [学会発表] Imaging analysis of the interaction between unusually large von-willebr and factor multimers and platelets on vascular endothelial cells in living animals (2011)
  • 著者名/発表者名: Brzoska T, Rybaltowski M, Suzuki Y, Mogami H, Chlebinska I, Tanaka A, Banno F, Miyata T, Urano T
  • 学会等名: XXIIIth Congress of the International Society on Thrombosis and Haemostasis
  • 発表場所: Kyoto
  • 年月日: 20110723-20110728
• [学会発表] Real time imaging of plasminogen binding to platelet-rich micro-thrombus in vivo (2011)
  • 著者名/発表者名: Urano T, Tanaka A, Suzuki Y, Brzoska T, Mogami H
  • 学会等名: XXIIIth Congress of the International Society on Thrombosis and Haemostasis
  • 発表場所: Kyoto
  • 年月日: 20110723-20110728
• [学会発表] Unique secretory mechanism of t-PA and the expression of fibrinolytic activity on vascular endothelial cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Suzuki Y, Urano T
  • 学会等名: XXIIIth Congress of the International Society on Thrombosis and Haemostasis
  • 発表場所: Kyoto
  • 年月日: 2011-07-28
• [学会発表] ECLT shows fibrinolytic potential to be determined by the balance between tPA and PAI-1. What we learned from PAI-1 deficient patients (2011)
  • 著者名/発表者名: Urano T, Suzuki Y
  • 学会等名: 57th Annual Meeting of Scientific & Standardization Committee of the ISTH
  • 発表場所: Kyoto
  • 年月日: 2011-07-22
• [図書] 「血栓溶解薬」In抗血栓薬の最前線-基礎と臨床-(編者齊藤英彦) (2011)
  • 著者名/発表者名: 浦野哲盟
  • 総ページ数: 145-154(316)
  • 出版者: 医薬ジャーナル社