| 研究概要 |
TGNからリソソームへ輸送される多くの膜貫通タンパク質とのアナロジーを考えた時、β-カテニンが結合できなくなったE-カドヘリンのTGNでの蓄積とリソソームへの輸送にはAP-1A複合体、AP-3A複合体あるいはGGA1,GGA2,GGA3といったクラスリンアダプター分子の関与が考えられる。また、E-カドヘリンの細胞内取り込みはクラスリン依存的に起こるが、多くの膜貫通タンパク質のクラスリン依存性の取り込みにはアダプター分子の内、AP-2複合体の関与が知られている。さらに、E-カドヘリンの側面膜領域への輸送にはAP-1B複合体あるいはAP-4複合体の関与の可能性が考えられる。しかしながら、実際にどれが真に働いているかは全く不明で、全く別のアダプターが機能している可能性も否定できない。
そこで、本年度は、第一段階としては上に挙げたアダプター分子群との結合の有無を調べることとした。京都大学 中山和久先生、理化学研究所大野博司先生から御分与頂いたアダプター分子のcDNAを使って、アミノ末端、カルボキシ末端あるいは分子の中央部にHA,Myc,Flag等のタグを付けるための作業を行った。次に、HEK293細胞でサブユニットを単独であるいは組み合わせてからE-カドヘリンと一過性に発現させ免疫沈降を行った。残念ながらこれまでの所、特異的な結合は見られていない。また、E-カドヘリンの細胞質ドメインをGST融合タンパク質として発現させ、HEK293細胞で発現させたこれらのアダプター分子との結合をGSTプルダウンアッセイにより調べたが、これも特異的な結合は見られなかった。したがって、カドヘリンの輸送に関与するアダプター分子は上に述べた分子群ではないことが判明した。そこで、今後は別の新規のアダプター分子群である可能性を念頭に、two-hybrid法を中心に検索していく予定である。
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