| 研究課題/領域番号 |
21590334
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
石田 敦彦 広島大学, 大学院・総合科学研究科, 准教授 (90212886)
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| 研究分担者 |
山崎 岳 広島大学, 大学院・総合科学研究科, 教授 (30192397)
根平 達夫 広島大学, 大学院・総合科学研究科, 助教 (60321692)
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| キーワード | プロテインキナーゼ / プロテインホスファターゼ / プロテアソーム / プロセシング / 細胞内局在 / 基質ターゲッティング / 活性制御 / インゲルホスファターゼアッセイ |
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| 研究概要 |
多機能性カルモデュリン依存性プロテインキナーゼの制御に関わる新しいプロテインホスファターゼとして申請者らが発見したCaMキナーゼホスファターゼ-N(CaMKPN)は、細胞内で著明なプロセシングを受ける。このプロセシングの生理的意義を明らかにするため、ヒトCaMKPNに比べて発現が容易で扱いやすいゼブラフィッシュCaMKPN(zCaMKPN)を用い、Neuro2a細胞に発現させて、そのプロセシングのパターンを調べた。Neuro2aにおいてzCaMKPNはユビキチン化を受け、プロセシングが、プロテアソーム阻害剤によって顕著に抑制されたことから、プロセシングにはプロテアソームが関与していることが示唆された。プロテアソーム阻害剤を用いてプロセシングを抑制した時の細胞内局在を調べることにより、zCaMKPNの細胞内局在がプロセシングによって制御されていることが示された。また、そのような局在の変化によって、zCaMKPNの細胞内の基質へのターゲッティングが大きく変化することも判明した。更に、C末部分がプロセシングによって切り取られることにより、zCaMKPNのホスファターゼ活性が著明な活性化を受けることも明らかとなった。以上の結果から、zCaMKPNはプロセシング反応により、細胞内局在、基質へのターゲッティング、酵素活性が制御されていることが示唆された。(論文投稿中)また、以上の研究を進める上で重要な役割を果たしたインゲルホスファターゼアッセイについて、その開発の経緯や応用分野、関連技術などをまとめた総説論文を発表した。
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