p63による扁平上皮癌細胞の活性化経路を決定するリン酸化プロテオーム解析

2011 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21590434
• 研究機関: 山梨大学
• 研究代表者: 加藤 伊陽子 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 准教授 (20333297)
• キーワード: p63 / PP2A / TCF-4 / Wnt

研究概要

下咽頭癌由来FaDu細胞でのHuman Phospho-MAPKアレイ解析などの結果を受け、1.他の細胞系でも同じことが起こるか、2.関連因子シグナル伝達系活性化、3.p63との複合体形成とリン酸化、4.遺伝子発現プロファイルなどを解析した。
1.p63を発現する扁平上皮癌細胞A431等でp63ノックダウンを行い、核内タンパク質のリン酸化について解析したところ、FaDu細胞でノックダウン2日目に検出されたGSK-3βのリン酸化の変化は検出されなかった。GSK-3βで制御されるβ-カテニンのリン酸化と核移行の変化も検出されなかった。
2.p63がWntシグナル伝達系の遺伝子発現に影響するかどうかにを調べるため、TCF-1/4結合配列をエンハンサーとするレポータ・アッセイを実施した。ΔNp63αアイソフォームによるTCF-4/βカテニン体存性の強い転写活性化が検出された。
3.(1)P63を発現するFaDu細胞でp63ノックダウン後、細胞質・核の分画を行い、脱リン酸化酵素PP2Aの免疫沈降を行い、PP2Aの活性測定と、タンパク質複合体形成およびリン酸化を解析した。その結果、核内でp63の一部はPP2Aと結合していたが、p63は酵素活性に影響しなかった。(2)HeLa細胞にΔNp63αと関連因子を導入してTCF-4で免疫沈降すると、β-カテニンとΔNp63αは共沈したが、PP2A、B56α、GSK-3βは共沈しなかった。
4.p63ノックダウン後に遺伝子発現プロファイル解析を行い、上記2,3を支持する結果が得られた。
以上の結果から、p63は核内でB56αおよびPP2Aと相互作用するが、GSK-3βのリン酸化を恒常的に制御するわけではなく、別反応としてTCF-4/βカテニンとの核内複合体形成によりWntシグナル伝達系を活性化することが強く示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Activation of the long terminal repeat of human endogenous retrovirus K by melanoma-specific transcription factor MITF-M (2011)
  • 著者名/発表者名: Katoh I, Mirova A, Kurata S, Murakami Y, Horikawa K, Nakakuki N, Sakai T, Hashimoto K, Maruyama A, Yonaga T, Fukunishi N, Moriishi K, Hirai H.
  • 雑誌名: Neoplasia 巻: 13 ページ: 1081-1092
  • DOI: DOI:10.1593/neo.11794
  • 査読あり
• [学会発表] 扁平上皮癌でのp63による核内GSK-3βを介したβカテニンの制御 (2012)
  • 著者名/発表者名: 加藤伊陽子
  • 学会等名: 第70回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場(愛知県)
  • 年月日: 2012-10-03
• [学会発表] p63による核内GSK-3βを介したβ-catenin依存性遺伝子発現の制御 (2012)
  • 著者名/発表者名: 倉田俊一
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都国際会議場(京都府)
  • 年月日: 2012-09-22
• [学会発表] Human Endogenous Retrovirus K (HERV-K) is induced by MITF-M, amelanogenesis transcription factor activated in melanomas (2012)
  • 著者名/発表者名: Katoh I
  • 学会等名: American Association for Microbiology General Meeting 2011
  • 発表場所: Ernest Morial Convention Center (New Orleans, USA)
  • 年月日: 2012-05-22
• [備考]
  • URL: http://sangaku.yamanashi.ac.jp/SearchResearcher/contents/7A93F75CD72F80F2.html