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細菌が生産する抗菌活性物質のバクテリオシンは腸球菌の病原性(定着能等)に関連すると考えられる。私達は臨床分離腸球菌から強い抗リステリア菌活性を持つ新規のSec依存性IIa型バクテリオシンを2種類(Bac31とBac43)発見し、分子遺伝学的な解析を行ってきた。これまでの解析からBac31とBac43ではその抗菌活性が異なり、Bac43の方がより強い活性を持ち、また抗菌域も広かった。しかし、分泌型(活性型)Bac31とBac43蛋白質はそれぞれ43アミノ酸、44アミノ酸から成るが、Bac43のC末端の1アミノ酸Rを除き、アミノ酸配列はほぼ同一であった。異なる内部配列は13、21、23、24、36番目の5つのアミノ酸残基のみであった。Bac43のアミノ酸残基置換変異体の解析から13番目と24番目のアミノ酸を同時にBac31型に置換(E13Q、G24R)するとその活性が減弱することが解った。ところが、5つのアミノ酸を全てBac31型に置換したキメラ型Bac43においても完全にはBac31と同等の活性及び活性域は示さなかった。そこで、それぞれのプロモーター配列、シグナル配列、免疫因子遺伝子を互いに置換したキメラ型バクテリオシンを作成し軟寒天重層法を用い解析した。またそれぞれのプロモーター活性を新規に構築したプラスミドベクターを用い測定した。これらの結果から、IIa型バクテリオシンの活性には分泌型のアミノ酸配列だけではなく、遺伝子の発現量(転写量、プラスミドコピー数)、蛋白の分泌効率(シグナル配列)などの菌体外分泌、蛋白量が影響していることが確認された。この中でも、シグナル配列が最も活性(菌体外分泌量)に影響を与える因子であることが解った。
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