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本研究は、ヒトのマクロファージ細胞等でエンドトキシンの認識にかかわる受容体複合体Toll-like receptor(TLR)/MD-2分子が活性型エンドトキシンを認識した際に2量体を形成する性質を利用してエンドトキシンの検出を行うエンドトキシンバイオセンサーを開発するものである。
本年度の目的はエンドトキシンバイオセンサー細胞の確立である。前年度にTLRとルシフェレースのN末側(Nluc)およびTLRとルシフェレースのC末側(Cluc)を結合させたキメラ遺伝子を共発現するプラスミド、および、CD14/MD-2共発現プラスミドを作成し、これらの遺伝子を安定的に発現する細胞を選別中である。また、これとは別に、TLR4の細胞内領域を除いた遺伝子(TLR4dC)とMD-2さらにNlucもしくはClucの3種の遺伝子のキメラ遺伝子(MD-2/TLR4dC/NlucおよびMD-2/TLR4dC/Cluc)を共発現するプラスミドを作成し、これらの遺伝子を安定的に発現する細胞を選別中である。後者の細胞では組み込むプラスミドが1種であり、安定発現細胞を得るのが容易であると思われる。また、この細胞にはCD14を発現させていないものの、可溶性CD14を用いることでエンドトキシンの応答性が確保可能である。
本測定系は既存の測定系が適用できない血液製剤中のエンドトキシン管理や、臨床分野におけるエンドトキシン血症等の診断等に利用可能なだけでなく、高度な特異性を持ち、生理的に意味のある、迅速・高感度な本検出法は基礎研究を含む広範囲にわたってのエンドトキシン研究に大きく寄与するものである。
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