研究課題
C型肝炎ウイルス(HCV)のNS2蛋白質は、ウイルスのポリプロテインを切断するプロテアーゼであるが、近年、感染性粒子形成に重要な役割を果たしている事が明らかになりつつある。本研究では、HCVのNS2蛋白質がどのようなメカニズムで感染性粒子形成に関わっているのかを明らかにするために、NS2蛋白質と相互作用を示し、感染性粒子の形成に関与する宿主因子の同定を試みた。昨年度までに、分割ユビキチン法を利用した酵母Two-Hybridスクリーニングにより同定したHCVNS2蛋白質結合因子の中から、さらにsiRNAによるノックダウンにより、HCVの増殖に関わる事を強く示唆する宿主因子を同定した。本年度はこの宿主因子のshRNA発現プラスミドを構築し、HCVの感染、複製を許容するヒト肝臓由来培養細胞から、この宿主因子が恒常的にノックダウンされている細胞株を樹立した。この細胞株ではHCVの増殖は顕著に抑制されていたが、shRNAのターゲット領域に変異を持つ宿主因子の遺伝子を用いてその発現を回復させると、HCVの増殖能も回復した。また、HCVのNS2蛋白質は他のウイルス蛋白質と相互作用する事により、ウイルスの粒子形成に関わると考えられている為、この宿主因子のノックダウンがHCV蛋白質同士の相互作用に及ぼす影響を解析したところ、宿主因子のノックダウンはHCVのNS2とE2の相互作用を減弱させる事が明らかとなった。以上の結果から、HCVNS2に結合し、さらに感染性粒子形成に関与する新規宿主因子の同定に成功すると伴に、そのメカニズムの一端を明らかにする事が出来た。
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