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donor probeとacceptor probeに、アビジン蛋白を結合させ、導入される色素probeの分子量の設定をしたところ、高分子化蛍光probeを使用した場合は核内に蛍光は認められなかったが、蛍光物質結合低分子物質核内まで到達してしまった。核内に集積せず、胞体に局在する至適donor probeとacceptor probeの設定が必要とされる。培養細胞にdonorおよびacceptor probeとincubateし、キメラRNA陽性細胞でFRET蛍光が上昇することをスペクトロメーター等により解析した。Bcr-ablに関しては、その発現が多いとされる細胞においても、蛍光が増強しなかったため、プローブの設定と蛍光感度を再点検したが、問題点(解決点)は見出せなかった。1細胞あたりの発現量が多い、KRAS mRNAに対し作製されたprobeの特異性を確認した。
QUAL-FRET法を利用した癌細胞分離方法の確認特異的蛍光probeの癌細胞(初期実験モデルとしての白血病細胞)への導入とgatingとsortingによる分離効率の調整、そして生細胞率の向上をねらった。
これまでの検討では生細胞率と導入効率は逆相関があり、KRAS mRNAでも確認した。細胞の種類によってはprobe導入により生存率が低下することが判明したが、技術的な向上をはかっていく必要がある。
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