環境化学物質における核内受容体ROR活性の探索とTh17細胞分化に及ぼす影響

2009 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21590675
• 研究機関: 北海道立衛生研究所
• 研究代表者: 小島 弘幸 北海道立衛生研究所, 健康科学部, 研究主査 (10414286)
• 研究分担者: 武内 伸治 北海道立衛生研究所, 健康科学部, 研究職員 (20414287) ; 室本 竜太 北海道大学, 薬学研究院, 助教 (30455597)
• キーワード: 環境保健 / 環境化学物質 / 核内受容体 / ROR / Th17 / IL-17

研究概要

近年、環境要因が疑われる疾患(特にアレルギーなどの免疫異常症)が増えており、普遍的に存在する環境化学物質もその要因の一つと考えられている。さらに最近、免疫研究の分野でCD4+ヘルパーT細胞の中でもTh1やTh2に属さないTh17と呼ばれるインターロイキン(IL)-17を特異的に産生する細胞の一群が注目され、この細胞の分化増殖がTh1/Th2バランスの変化により生じる免疫異常症の増悪に影響を及ぼすことが報告された。また、このTh17の細胞分化を制御するマスター遺伝子として、レチノイド関連オーファン核内受容体RORが報告されたことから、環境化学物質によるRORを介する作用を明らかにすることは、環境化学物質と免疫異常を伴う各種疾患との因果関係を解明する一助になると考えられる。
本研究では最初にRORを介するレポーターアッセイ法の開発を行った。チャイニーズハムスター卵巣由来(CHO)細胞に(1)ROR発現プラスミド、(2)ROR応答配列を有するレポーター(ルシフェラーゼ)プラスミド、(3)コントロールプラスミドを同時に導入した。化学物質を添加し24時間培養後に細胞内に産生されたルシフェラーゼの酵素活性を測定することでアッセイ法の確立に成功した。次に、このアッセイ系を用いて農薬200物質のROR活性をスクリーニングした。その結果、いくつかの農薬がRORによる転写活性を濃度依存的に抑制することを認めた。さらに、これらROR活性を有する農薬のTh17細胞分化への影響を調べるため、マウスTリンフォーマEL4細胞を用いて、刺激剤添加条件下でのIL-17発現をRT-PCR法にて測定した。レポーターアッセイ法でROR活性を認めた農薬等の化学物質は、このIL-17mRNAの発現を濃度依存的に抑制することが明らかとなった。

研究成果

• [雑誌論文] [Minireview]Endocrine-disrupting Potential of Pesticides via Nuclear Receptors and Aryl Hydrocarbon Receptor (2010)
  • 著者名/発表者名: Hiroyuki Kojima, Shinji Takeuchi, Tadanori Nagai
  • 雑誌名: Journal of Health Science (掲載確定, 印刷中)
  • 査読あり
• [雑誌論文] 水性塗料成分1-メチル-2-ピロリドン及びテキサノールによる新築小学校の室内空気汚染 (2010)
  • 著者名/発表者名: 小林智、武内伸治、小島弘幸、高橋哲夫、神和夫、秋津裕志、伊佐治信一
  • 雑誌名: 日本室内環境学会誌 (掲載確定, 印刷中)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nuclear Hormone Receptor Activity of Brominated Diphenyl Ethers and Their Hydroxylarted and Methoxylated Metabolites in Transactivation Assays Using Chinese Hamster Ovary Cells (2009)
  • 著者名/発表者名: Hiroyuki Kojima, Shinji Takeuchi, Naoto Uramaru, Kazumi Sugihara, Takahiko Yoshida, Shigeyuki Kitamura
  • 雑誌名: Environmental Health Perspectives VOL.117 ページ: 1210-1218
  • 査読あり
• [雑誌論文] Application of a Bioassay Using DR-EcoScreen Cells to the Determination of Dioxins in Ambient Air : A Comparative Study with HRGC-HRMS Analysis (2009)
  • 著者名/発表者名: Katsunori Anezaki, Katsuyuki Yamaguchi, Shinji Takeuchi, Mitsuru Iida, Kazuo Jin, Hiroyuki Kojima
  • 雑誌名: Environmental Science & Technology VOL.43 ページ: 7478-7483
  • 査読あり
• [雑誌論文] Signal-transducing Adaptor Protein-2 Regulates Stromal Cell-derived Factor-1 Alpha-induced Chemotaxis in T Cells (2009)
  • 著者名/発表者名: Yuichi Sekine, Osamu Ikeda, Satoshi Tsuji, Chikako Yamamoto, Ryuta Muromoto, Asuka Nanbo, Kenji Oritani, Akihiko Yoshimura, Tadashi Matsuda
  • 雑誌名: Journal of Immunology VOL.183 ページ: 7966-7974
  • 査読あり
• [雑誌論文] The Exon-junction Complex Proteins, Y14 and MAGOH Regulate STAT3 Activation (2009)
  • 著者名/発表者名: Ryuta Muromoto, Naohisa Taira, Osamu Ikeda, Kaname Shiga, Shinya Kamitani, Sumihito Togi, Shiho Kawakami, Yuichi Sekine, Asuka Nanbo, Kenji Oritani, Tadashi Matsuda
  • 雑誌名: Biochemical and Biophysical Research Communications VOL.382 ページ: 63-68
  • 査読あり
• [学会発表] 臭素化難燃剤PBDE水酸化体の核内受容体アゴニスト及びアンタゴニスト活性 (2010)
  • 著者名/発表者名: 小島弘幸、武内伸治、杉原数美、浦丸直人、北村繁幸
  • 学会等名: 日本薬学会第130年会総会
  • 発表場所: 桃太郎アリーナ(岡山市)
  • 年月日: 2010-03-30
• [学会発表] P.acnes誘導性肉芽腫形成におけるTyk2の役割 (2010)
  • 著者名/発表者名: 黒田誠、室本竜太、松田正
  • 学会等名: 日本薬学会第130年会総会
  • 発表場所: 就実大学(岡山市)
  • 年月日: 2010-03-28
• [学会発表] A new biological function of Jun activation domain-binding protein 1(JAB1)/CSN5 in the regulation of type I interferon signaling (2009)
  • 著者名/発表者名: 室本竜太、関根勇一、織谷健司、下田和哉、松田正
  • 学会等名: 第39回日本免疫学会総会・学術集会
  • 発表場所: 大阪国際会議場(大阪市)
  • 年月日: 2009-12-02
• [学会発表] TR, PDIへの親和性に対する臭素化難燃剤の構造活性相関 (2009)
  • 著者名/発表者名: 岩瀬恵理、佐能正剛、今岡進、岡田和嗣、加藤善久、小島弘幸、浦丸直人、杉原数美、北村繁幸、黒木広明、太田茂
  • 学会等名: フォーラム2009衛生薬学・環境トキシコロジー(日本薬学会主催)
  • 発表場所: 沖縄コンベンションセンター(宜野湾市)
  • 年月日: 2009-11-06
• [学会発表] ピレスロイド系殺虫剤によるヒト及びマウスPXR/CARを介した転写活性の比較 (2009)
  • 著者名/発表者名: 小島弘幸、武内伸治、佐田文宏
  • 学会等名: フォーラム2009衛生薬学・環境トキシコロジー(日本薬学会主催)
  • 発表場所: 沖縄コンベンションセンター(宜野湾市)
  • 年月日: 2009-11-05
• [学会発表] 高感度レポーターアッセイ法を用いた環境化学物質の核内受容体活性の検出およびダイオキシン類生物検定法への適用 (2009)
  • 著者名/発表者名: 小島弘幸
  • 学会等名: 生物化学的測定研究会第14回学術シンポジウム
  • 発表場所: つくばインフォメーションセンター(つくば市)
  • 年月日: 2009-10-30
• [学会発表] Nuclear Hormone Receptor Activity of Brominated Diphenyl Ethers and Their Hydroxylarted and Methoxylated Metabolites in Transactivation Assays Using Chinese Hamster Ovary Cells (2009)
  • 著者名/発表者名: Hiroyuki Kojima, Shinji Takeuchi, Naoto Uramaru, Kazumi Sugihara, Takahiko Yoshida, Shigeyuki Kitamura
  • 学会等名: HORIBA International Conference/CDBIM Symposium : 21th Century Advances in the Molecular Toxicology of Environmental Chemicals and Pathogenesis of Disease
  • 発表場所: 東京大学鉄門記念講堂(東京都)
  • 年月日: 2009-10-26
• [学会発表] 臭素化難燃剤PBDE及びそれら代謝物によるホルモン受容体を介した内分泌撹乱作用 (2009)
  • 著者名/発表者名: 小島弘幸、武内伸治、浦丸直人、杉原数美、北村繁幸
  • 学会等名: 日本薬学会北海道支部第132例会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター(札幌市)
  • 年月日: 2009-05-30