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2011 年度 実績報告書

プラークアッセイ法を応用した細胞障害性HCV株のクローン化と機能解析

研究課題

研究課題/領域番号 21590832
研究機関東京医科歯科大学

研究代表者

大岡 真也  東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 講師 (90361691)

研究分担者 坂本 直哉  東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 寄附講座教員 (10334418)
東 正新  東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 助教 (10376783)
渡辺 守  東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (10175127)
キーワードHCVレプリコン / HCV-JFH1培養系
研究概要

本研究では、プラークアッセイ法をHCV感染系に応用し、細胞障害性プラーク単離の反復を行い、より増殖力・細胞障害性の強いウイルスクローンの単離とその機能解析およびウイルス遺伝子変異の解析を遂行し以下の結果を得た。(1)HCVプラーク単離株の遺伝子解析で同定した、NS5Bの5個のアミノ酸変異を導入した変異ウイルスクローンをHun751細胞にトランスフェクションしウイルス増殖粒子形成能を解析したところ、3箇所の変位クローンで親株JFH1より著明に高レベルの粒子産生が観察された。以上より、HCVの特定の遺伝子構造がウイルスの増殖・感染能を規定していることが示された。(2)変異を個々に導入した細胞障害性クローンを感染レセプター欠損Huh7細胞に導入し増殖、粒子分泌レベルを解析したところいずれのクローンも細胞内増殖が著明に亢進しておりウイルス粒子形成・分泌能は野生型と同等であった。(3)3カ所の変異を導入したHCVクローンをヒト肝臓移植キメラマウスに接種したところ変異ウイルスは感染早期に感染早期の血中ウイルスレベルが高値であったが安定期においては野生型と同等のレベルになり変異が消失した野生ウイルスが増加した。次年度以降においては、急性重症型C型肝炎、肝移植後再発肝炎症例より新たな細胞障害性HCVを構築しHCVの細胞障害効果の解析を進める。

  • 研究成果

    (36件)

すべて 2012 2011

すべて 雑誌論文 (22件) (うち査読あり 22件) 学会発表 (13件) 産業財産権 (1件)

  • [雑誌論文] Inhibition of hepatitis C virus NS5B polymerase by S-trityl-L-cysteine derivatives2012

    • 著者名/発表者名
      Kaushik-Basu N, Sakamoto N
    • 雑誌名

      Eur J Med Chem

      巻: 49 ページ: 191-199

    • DOI

      10.1016/j.ejmech.2012.01.010

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Age and total ribavirin dose are independent predictors of relapse after interferon therapy in chronic hepatitis C revealed by data mining analysis2012

    • 著者名/発表者名
      Kurosaki M, Sakamoto N, et al
    • 雑誌名

      Antivir Ther

      巻: 17(1) ページ: 35-43

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Identification of novel N-(morpholine-4-carbonyloxy) amidine compounds as potent inhibitors against hepatitis C virus replication2012

    • 著者名/発表者名
      Kusano-Kitazume A, Sakamoto N, Azuma S, Watanabe M, et al
    • 雑誌名

      Antimicrob Agent Chemother

      巻: 56(3) ページ: 1315-1323

    • DOI

      10.1128/AAC.05764-11

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Data mining model using simple and readily available factors could identify patients at high risk for hepatocellular carcinoma in chronic hepatitis C2012

    • 著者名/発表者名
      Kurosaki M, Sakamoto N, et al
    • 雑誌名

      J Hepatol

      巻: 56(3) ページ: 602-608

    • DOI

      10.1016/j.jhep.2011.09.011

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Association of gene expression involving innate immunity and genetic variation in IL28B with antiviral response2011

    • 著者名/発表者名
      Asahina Y, Sakamoto N, et al
    • 雑誌名

      Hepatology

      巻: 55(1) ページ: 20-29

    • DOI

      10.1002/hep.24623

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Analysis of the complete open reading frame of hepatitis C virus in genotype 2a infection reveals critical sites influencing the response to peginterferon and ribavirin therapy2011

    • 著者名/発表者名
      Kadokura M, Sakamoto N, Watanabe M, et al
    • 雑誌名

      Hepatol Int

      巻: 5(3) ページ: 789-799

    • DOI

      10.1007/s12072-011-9267-x

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Use of human hepatocyte-like cells derived from induced pluripotent stem cells as a model for hepatocytes in hepatitis C virus infection2011

    • 著者名/発表者名
      Yoshida T, Sakamoto N, et al
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun

      巻: 416(1-2) ページ: 119-124

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2011.11.007

    • 査読あり
  • [雑誌論文] A new method for induced fit docking (GENIUS) and its application to virtual screening of novel HCV NS3-4A protease inhibitors2011

    • 著者名/発表者名
      Takaya D, Sakamoto N, et al
    • 雑誌名

      Bioorganic & Medicinal Chemistry

      巻: 19(22) ページ: 6892-6905

    • DOI

      10.1016/j.bmc.2011.09.023

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Serum interleukin-6 levels correlate with resistance to treatment of chronic hepatitis C infection with pegylated-interferon-alpha2b plus ribavirin2011

    • 著者名/発表者名
      Ueyama M, Sakamoto N, et al
    • 雑誌名

      Antivir Ther

      巻: 16 ページ: 1081-1091

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Genome-wide association study identified ITPA/DDRGK1 variants reflecting thrombocytopenia in pegylated interferon and ribavirin therapy for chronic hepatitis C2011

    • 著者名/発表者名
      Tanaka Y, Sakamoto N, et al
    • 雑誌名

      Human Molecular Genetics

      巻: 20(17) ページ: 3507-3516

    • DOI

      10.1093/hmg/ddr249

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Pretreatment Prediction of Anemia Progression by Peginterferon Plus Ribavirin Therapy in Chronic Hepatitis C : Decision-Tree Analysis2011

    • 著者名/発表者名
      Hiramatsu N, Sakamoto N, et al
    • 雑誌名

      J Gastroenterol

      巻: 46(9) ページ: 1111-1119

    • DOI

      10.1007/s00535-011-0412-z

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Analysis of the complete open reading frame of genotype 2b hepatitis C virus in association with the response to peginterferon and ribavirin therapy2011

    • 著者名/発表者名
      Kadokura M, Sakamoto N, Watanabe M, et al
    • 雑誌名

      PLoS One

      巻: 6(9) ページ: e24514

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0024514

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Pretreatment prediction of response to peginterferon plus ribavirin therapy in genotype 1 chronic hepatitis C using data mining analysis2011

    • 著者名/発表者名
      Kurosaki M, Sakamoto N, et al
    • 雑誌名

      J Gastroenterol

      巻: 46(3) ページ: 401-409

    • DOI

      10.1007/s00535-010-0322-5

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Adenovirus vector-mediated assay system for hepatitis C virus replication2011

    • 著者名/発表者名
      Yoshida T, Sakamoto N, et al
    • 雑誌名

      Nucleic Acids Res

      巻: 39(10) ページ: e64

    • DOI

      10.1093/nar/gkr047

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Analysis of interferon signaling by infectious hepatitis C virus clones with substitutions of core amino acids 70 and 912011

    • 著者名/発表者名
      Funaoka Y, Sakamoto N, Azuma S, Watanabe M, et al
    • 雑誌名

      J Virol

      巻: 85(12) ページ: 5986-5994

    • DOI

      10.1128/JVI.02583-10

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Inhibitory effect of a triterpenoid compound, with or without alpha interferon, on hepatitis C virus infection2011

    • 著者名/発表者名
      Watanabe T, Sakamoto N, Azuma S, Oooka S, Watanabe M, et al
    • 雑誌名

      Antimicrob Agents Chemother

      巻: 55(6) ページ: 2537-2545

    • DOI

      10.1128/AAC.01780-10

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Studies on virus kinetics using infectious fluorescence-tagged hepatitis C virus cell culture2011

    • 著者名/発表者名
      Yamamoto M, Sakamoto N, Azuma S, Watanabe M, et al
    • 雑誌名

      Hepatol Res

      巻: 41 ページ: 258-269

    • DOI

      10.1111/j.1872-034X.2010.00771.x

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Association between lipid accumulation and the cannabinoid system in Huh7 cells expressing HCV genes2011

    • 著者名/発表者名
      Toyoda M, Sakamoto N, et al
    • 雑誌名

      Int J Mol Med

      巻: 27 ページ: 619-624

    • DOI

      10.3892/ijmm.2011.622

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Association of IL28B variants with response to pegylated-interferon alpha plus ribavirin combination therapy reveals intersubgenotypic differences between genotypes 2a and 2b2011

    • 著者名/発表者名
      Sakamoto N, Azuma S, Watanabe M, et al
    • 雑誌名

      J Med Virol

      巻: 83 ページ: 871-878

    • DOI

      10.1002/jmv.22038

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Cholestatic liver fibrosis and toxin-induced fibrosis are exacerbated in matrix metalloproteinase-2 deficient mice2011

    • 著者名/発表者名
      Onozuka I, Sakamoto N, Watanabe M, et al
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun

      巻: 406 ページ: 134-140

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2011.02.012

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Pre-treatment prediction of response to pegylated-interferon plus ribavirin for chronic hepatitis C using genetic polymorphism in IL28B and viral factors2011

    • 著者名/発表者名
      Kurosaki M, Sakamoto N, Watanabe M, et al
    • 雑誌名

      J Hepatol

      巻: 54 ページ: 439-448

    • DOI

      10.1016/j.jhep.2010.07.037

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Sequences in the interferon sensitivity-determining region and core region of hepatitis C virus impact pretreatment prediction of response to PEG-interferon plus ribavirin : data mining analysis2011

    • 著者名/発表者名
      Kurosaki M, Sakamoto N, et al
    • 雑誌名

      J Med Virol

      巻: 83 ページ: 445-452

    • DOI

      10.1002/jmv.22005

    • 査読あり
  • [学会発表] ITPA gene variant protects against treatment-induced anemia and improves viral clearance by pegylated interferon-alfa and ribavirin therapy in chronic hepatitis C patients2011

    • 著者名/発表者名
      Sakamoto N, Azuma S, Watanabe M, et al
    • 学会等名
      62th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
    • 発表場所
      San Francisco
    • 年月日
      2011-11-04
  • [学会発表] MMP-2 and MMP-14 derived from donor cells enhance therapeutic efficacy of liver cell transplantation in mice2011

    • 著者名/発表者名
      Kakinuma S, Sakamoto N, Watanabe M, et al
    • 学会等名
      62th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
    • 発表場所
      San Francisco
    • 年月日
      2011-11-04
  • [学会発表] A high-content screening assay using infectious fluorescence-tagged hepatitis C virus reveals candidates for small molecule inhibitors of viral entry2011

    • 著者名/発表者名
      Kusano-Kitazume A, Sakamoto N, Watanabe M, et al
    • 学会等名
      62th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
    • 発表場所
      San Francisco
    • 年月日
      2011-11-04
  • [学会発表] Loww of Wnt5A promotes biliary differentiation of murine hepatic stem/progenitor cells2011

    • 著者名/発表者名
      Kiyohashi K, Sakamoto N, Watanabe M, et al
    • 学会等名
      62th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
    • 発表場所
      San Francisco
    • 年月日
      2011-11-04
  • [学会発表] Antiviral effect of a novel interferon-inducible protein, IFI-27, against hepatitis C virus replication2011

    • 著者名/発表者名
      Itsuil Y, Sakamoto N, Watanabe M, et al
    • 学会等名
      62th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
    • 発表場所
      San Francisco
    • 年月日
      2011-11-04
  • [学会発表] IL-6-mediated intersubgenotypic variation of interferon sensitivity in hepatitis C virus genotype 2a/2b chimeric clones2011

    • 著者名/発表者名
      Suda G, Sakamoto N, Azuma S, Watanabe M, et al
    • 学会等名
      62th. Annual Meeting of American Association for the study of Liver Diseases
    • 発表場所
      San Francisco
    • 年月日
      2011-11-04
  • [学会発表] Prediction model of ribavirin-induced anemia incorporating ITPA genotype could identify chronic hepatitis C patients at high risk of relapse among virological responders to pegylated-interferon and ribavirin2011

    • 著者名/発表者名
      Kurosaki M, Sakamoto N, et al
    • 学会等名
      62th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
    • 発表場所
      San Francisco
    • 年月日
      2011-11-04
  • [学会発表] IL28B and ITPA gene variants correlate with treatment efficacy in pegylated-interferon plus ribavirin therapy for chronic hepatitis C2011

    • 著者名/発表者名
      Matsuura K, Sakamoto N, et al
    • 学会等名
      62th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
    • 発表場所
      San Francisco
    • 年月日
      2011-11-04
  • [学会発表] Mutations in the interferon sensitivity determining region of HCV, age and total ribavirin dose is an independent predictor of relapse among early virological responders to peg-interferon plus ribavirin therapy2011

    • 著者名/発表者名
      Kurosaki M, Sakamoto N, et al
    • 学会等名
      62th. Annual Meeting of American Association for the study of Liver Diseases
    • 発表場所
      San Francisco
    • 年月日
      2011-11-04
  • [学会発表] Development of an RNA polymerase I-driven adenoviral vector and its application in an HCV replication assay2011

    • 著者名/発表者名
      Yoshida T, Sakamoto N, et al
    • 学会等名
      18th. International Meeting on Hepatitis C Virus & Related Viruses
    • 発表場所
      Seattle
    • 年月日
      2011-09-08
  • [学会発表] Analysis of interferon signaling by infectious hepatitis C virus clones with substitutions of core amino acids 70 and 912011

    • 著者名/発表者名
      Sakamoto N, Watanabe M, et al
    • 学会等名
      18th. International Meeting on Hepatitis C Virus & Related Viruses
    • 発表場所
      Seattle
    • 年月日
      2011-09-08
  • [学会発表] HCV-NS4B targets STING and abrogates RIG-I-mediated type-I interferon- dependent innate immune response2011

    • 著者名/発表者名
      Nitta S, Sakamoto N, Watanabe M, et al
    • 学会等名
      18th. International Meeting on Hepatitis C Virus & Related Viruses
    • 発表場所
      Seattle
    • 年月日
      2011-09-08
  • [学会発表] Development of RNA pol-driven adenovirus vector expressing hepatitis C virus replicon2011

    • 著者名/発表者名
      Yamagishi Y, Sakamoto N, et al
    • 学会等名
      Experimental Biology 2011
    • 発表場所
      Washington
    • 年月日
      2011-04-13
  • [産業財産権] C型肝炎ウイルスの増殖を抑制する医薬組成物2011

    • 発明者名
      坂本直哉、渡辺守、北詰晶子、萩原正敏、奥野友紀子
    • 権利者名
      東京医科歯科大学
    • 産業財産権番号
      特願2011-194082
    • 出願年月日
      2011-09-06

URL: 

公開日: 2013-06-26  

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