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前年度は肝再生を担う分子メカニズムとして、細胞周期関連分子、特にp27^<kip1>の発現・分解系に着目し、p27^<kip1>を介してG0期にある肝細胞をG1期へと再進入することが可能と考えられるエストラジオール(E2)を用いた肝再生促進モデルで検討した。Ki67やBrdUに対する免疫染色で陽性率が増加したため、E2投与が細胞周期を促進させ肝再生の一端を担っている事を確認した。さらにその効果が肝障害後のE2の投与時期の違いにより、その生存率が異なる事を見いだした。そのためそれぞれの投与時期における細胞周期関連分子、ならびにapoptosisに関与する遺伝子の発現の違いが生存率の違いに結びついている可能性を考え、Western blotにて蛋白の発現解析を行なった。その結果、E2の投与時期の違いにより細胞周期関連蛋白の発現パターンが異なること、またapoptosisの頻度も異なることを確認し、障害肝における再生において、これらの分子が重要な働きをしていることが確認出来た。しかし、マウスを用いた再検を行なうと必ずしも一定の発現パターンの変化を示さなかったため、培養細胞系を用いて同様の結果が得られるか検討を行った。しかしマウスでの検討と同様の結果を得る事はできなかった。今後はコラゲナーゼ処理で得られたマウス初代培養細胞を用いて再度検討を行い、E2投与による細胞増殖促進の効果に関する分子の同定を目指す。その結果を踏まえて、それぞれの時期での関連分子の発現解析ならびにDNAマイクロアレイによる網羅的解析により、再生に関与する責任分子の同定ならびにp27の上流のシグナルを担う分子の同定を行なうための研究を行う予定である。
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