C型肝炎ウイルス複製複合体に含まれる蛋白の同定とウイルス複製における役割の解析

2011 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21590867
• 研究機関: 国立感染症研究所
• 研究代表者: 相崎 英樹 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 室長 (00333360)
• 研究分担者: 鈴木 哲朗 浜松医科大学, 感染症講座, 教授 (00250184)
• キーワード: ウイルス / 感染症 / 癌 / 内科 / プロテオーム

研究概要

C型肝炎ウイルス(HCV)のゲノム複製を担う複製複合体(RC)はHCV非構造蛋白質と宿主因子から構成されると考えられるが、HCV複製調節に関わる宿主因子は十分に明らかにされていない。本研究では、プロテオミクス技術を利用してHCVRCを構成する宿主因子を同定し、その機能解析を行った。Membrane flotation assayによりHCVRCを含む膜分画を粗精製し、二次元蛍光ディファレンシャルゲル電気泳動と質量分析法によってHCVRC分画に含まれる宿主因子を同定した。二次元電気泳動にて約1300蛋白が検出され、45蛋白(3.5%)が、高HCV複製期に1.5倍以上増加していた。その中には二種類の分子シャペロンT-complex polypeptide 1 ring complex subunit ε(CCT5)及びHeat shock cognate protein 70が含まれていた。ウエスタンブロット解析から、両蛋白は細胞の増殖相によって発現レベルに差は認められないものの、高HCV複製細胞の膜分画で明らかな量的増加を確認した。また、エピトープタグ免疫沈降法により、CCT5がHCV NS5B蛋白と特異的に結合することを見出した。さらに、CCT5 siRNAによってHCVRNA複製レベルが低下すること、また薬剤処理によってT-complex polypeptide 1 ring complexを細胞内で誘導したところHCV複製が亢進することを見出した。CCT5を含むT-complex polypeptide 1 ring complexは、本来細胞質でシャペロンとして作用し、蛋白質の機能的な立体構造形成に寄与する。今回同定された分子シャペロンがNS5B蛋白との結合を介してHCV RCへ取り込まれRNA複製調節に関与する可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] The Reference Panel of Japan for Evaluation of Hepatitis C Virus RNA and Core Antigen Quantitative Assays (2012)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Sugiyama N, Watashi K, Masaki T, Suzuki R, Aizaki H, Mizuochi T, Wakita T, Kato T
  • 雑誌名: J Clin Microbiol. 巻: 11 ページ: 1943-9
  • DOI: 22495557
  • 査読あり
• [雑誌論文] Visualization and measurement of ATP levels in living cells replieating hepatitis C virus genome RNA (2012)
  • 著者名/発表者名: Ando T, Imamura H, Suzuki R, Aizaki H, Watanabe T, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: PLoS Pathog 巻: 8
  • DOI: 22396648
  • 査読あり
• [雑誌論文] The structural requirements of virion-associated cholesterol for infectivity, buoyant density and apolipoprotein association of hepatitis C virus (2011)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto M, Aizaki H, Fukasawa M, Teraoka T, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: J Gen.Virol. 巻: 92 ページ: 2082-91
  • DOI: 21593275
  • 査読あり
• [雑誌論文] Hepatitis C virus RNA replication in human stellate cells regulates gene expression of extracellular matrix-related molecules (2011)
  • 著者名/発表者名: Watanabe N, Aizaki H, Matsuura T, Kojima S, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 巻: 407 ページ: 135-40
  • DOI: 21371436
  • 査読あり
• [雑誌論文] Chaperonin TRiC/CCT participates in replication of hepatitis Cvirus genome via interaction with the viral NS5B protein (2011)
  • 著者名/発表者名: Inoue Y, Aizaki H, Hara H, Matsuda M, Ando T, Shimoji T, Murakami K, Masaki T, Shoji I, Homma S, Matsuura Y, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: Virology 巻: 410 ページ: 38-47
  • DOI: 21093005
  • 査読あり
• [学会発表] C型肝炎ウイルスNS3プロテアーゼによるTGF-βI型受容体を介したTGF-βシグナルの活性化 (2011)
  • 著者名/発表者名: 坂田幸大郎、原詳子、鈴木哲朗、渡邊則幸、相崎英樹、高谷大輔、松本武久、井本正哉、脇田隆字、小嶋聡一
  • 学会等名: 第25回肝類洞壁細胞研究会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 20110000
• [学会発表] C型肝炎ウイルス研究の進歩と展望 (2011)
  • 著者名/発表者名: 相崎英樹
  • 学会等名: 第58回日本感染症学会総会・学術講演会・教育講演
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 20110000
• [学会発表] HCV感染に伴う宿主細胞の脂質代謝の変化と代謝産物のメタボロミクス解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 相崎英樹、鈴木哲朗、脇田隆字
  • 学会等名: 第47回日本肝臓学会総会・シンポジウム
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 20110000
• [学会発表] 1999年から2009年における日本のC型急性肝炎の発生状況 (2011)
  • 著者名/発表者名: 相崎英樹、多田有希、松本善弘、後藤耕司、渡士幸一、鈴木亮介、田中純子、鈴木哲朗、岡部信彦、脇田隆字
  • 学会等名: 第47回日本肝臓学会総会・シンポジウム
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 20110000
• [学会発表] 国内献血検体を用いたC型肝炎ウイルスパネル検体の作製とウイルス量測定法の評価 (2011)
  • 著者名/発表者名: 加藤考宣、村上麻子、政木隆博、相崎英樹
  • 学会等名: 第47回日本肝臓学会総会・シンポジウム
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 20110000
• [学会発表] HCV NS3 Protease Mimics TGF-□2 and Activates TGF-□ Signals via Type I Receptor (2011)
  • 著者名/発表者名: 坂田幸大郎、原詳子、鈴木哲朗、渡邊則幸、相崎英樹、高谷大輔、松本武久、井本正哉、脇田隆字、小嶋聡一
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2011-12-13
• [学会発表] Screening of small molecules affecting the production of hepatitis B virus (2011)
  • 著者名/発表者名: Watashi K, Uchida N, Suzuki R, Aizaki H, Wakita T
  • 学会等名: International meeting of molecular biology of hepatitis B virus
  • 発表場所: 米国フロリダ州
  • 年月日: 2011-10-10
• [学会発表] Identification of host factor that interacts with hepatitis C virus NS2 protein and is involved in the viral assembly (2011)
  • 著者名/発表者名: Suzuki R, Suzuki T, Saito K, Matsuda M, Watashi K, Matsuura Y, Wakita K, Aizaki H
  • 学会等名: XV International Congress of Virology
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2011-10-10
• [学会発表] Identification of lipid droplet-associated membrane proteins that are involved in HCV production (2011)
  • 著者名/発表者名: Aizaki H, Matsumoto Y, Goto K, Watashi K, Suzuki R, Fukasawa M, Hanada K, Sato S, Takahashi N, Matsuura Y, Motojima K, Miyamura T, Suzuki T, Wakita T
  • 学会等名: 18^<th> International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: 米国ワシントン州
  • 年月日: 2011-09-08
• [学会発表] Identification and functional analysis of small molecules inhibiting the late step of hepatitis C virus life cycle (2011)
  • 著者名/発表者名: Watashi K, Uchida N, Suzuki R, Aizaki H, Wakita T
  • 学会等名: 18^<th> International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: 米国ワシントン州
  • 年月日: 2011-09-08
• [学会発表] Discovery of full-length HCV genome quasispecies by deep sequencing (2011)
  • 著者名/発表者名: Ando T, Aizaki H, Sugiyama M, Mizokami M, Sekizuka T, Kuroda M, Wakita T
  • 学会等名: 18^<th> International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: 米国ワシントン州
  • 年月日: 2011-09-08
• [学会発表] Identification of novel NS5A-associated proteins in the host-cell membrane fraction and their role in HCV life cycle (2011)
  • 著者名/発表者名: Goto K, Kimura T, Watashi K, Suzuki R, Yamagoe S, Miyamura T, Moriya K, Yotsuyanagi H, Koike K, Suzuki T, Wakita T, Aizaki H
  • 学会等名: 18^<th> International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: 米国ワシントン州
  • 年月日: 2011-09-08
• [学会発表] Halopemide inhibited a post-assembly step in hepatitis C virus life cycle (2011)
  • 著者名/発表者名: Uchida N, Watashi K, Suzuki R, Aizaki H, Chiba J, Wakita T
  • 学会等名: 18^<th> International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: 米国ワシントン州
  • 年月日: 2011-09-08
• [学会発表] Signal peptidase complex 1 participates in the assembly of hepatitis C virus through an interaction with NS2 (2011)
  • 著者名/発表者名: Suzuki R, Suzuki T, Saito K, Matsuda M, Watashi K, Mat suura Y, Wakita T, Aizaki H
  • 学会等名: 18^<th> International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: 米国ワシントン州
  • 年月日: 2011-09-08
• [学会発表] ヒト肝細胞癌細胞の3次元培養系は"癌モデル"なのか、"肝臓モデル"なのか?-glucose代謝からの検討- (2011)
  • 著者名/発表者名: 松浦知和、丸島秀樹、前橋はるか、大川清、松本善弘、永妻啓介、田中賢、高木一郎、石井雄二、斎藤勝也、政木隆博、相崎英樹
  • 学会等名: 第47回日本肝臓学会総会・シンポジウム
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-06-02
• [図書] C型肝炎ウイルスの複製と粒子形成 (2011)
  • 著者名/発表者名: 鈴木哲朗、原弘道、相崎英樹、鈴木亮介、政木隆博
  • 総ページ数: 6
  • 出版者: 日本ウイルス学会
• [図書] HCVの生活環における脂質の役割 (2011)
  • 著者名/発表者名: 相崎英樹
  • 総ページ数: 5
  • 出版者: 日本臨床
• [備考]
  • URL: http://www.nih.go.jp/niid/ja/