C型肝炎ウイルスの培養細胞と生体での増殖能の比較と慢性化機序の解明

2011 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21590868
• 研究機関: 国立感染症研究所
• 研究代表者: 加藤 孝宣 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 室長 (20333370)
• キーワード: HCV / 慢性感染 / 動物モデル / 感染実験 / ウイルス増殖モデル

研究概要

C型肝炎ウイルス(HCV)感染は成人感染でも高率に慢性化することが知られているが、この機序は未だ明らかでない。そこで、HCV JFH-1株のチンパンジー感染実験において、生体内で遷延感染を起こした株での変異が、培養細胞内での複製増殖および細胞死に与える影響を検討することでこのウイルスの持続感染機序の解明を試みた。
培養細胞にて作製したJFH-1ウイルス、及びJFH-1株が分離された劇症肝炎患者急性期血清を二頭のチンパンジーにそれぞれ接種し、感染したHCV JFH-1株の全ORF領域の塩基配列を確認した。同定された変異をJFH-1株に導入し、それらの変異がJFH-1株の増殖に与える影響を検討した。
チンパンジー内での適応変異を持った株では通常のJFH-1株に比べ、増殖複製能は低いが感染性ウィルス粒子の生成効率が高く、その結果培養上清中に放出されるウイルス量が高値となっていた。さらにこれらのウイルスの感染細胞のアポトーシス刺激に対する反応性を検討した。チンパンジー感染実験で得られた変異株の感染細胞では通常のJFH-1株感染に比べ、TNF-αやFAS ligandなどのサイトカイン投与によるアポトーシス誘導が強く抑制されていた。
HCV JFH-1株が分離された患者血清を接種したチンパンジーから得られた変異株は、培養細胞内では増殖効率は低かったがウイルス粒子生成効率が高く、その結果多くの細胞に感染可能であった。さらにこの変異株はサイトカインにより誘導されるアポトーシスの抑制作用を持ち、生体内での変異により獲得されたこれらの機能がHCVの慢性感染の成立機序に関わっている可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] In vivo adaptation of hepatitis C virus in chimpanzees for efficient virus production and evasion of apoptosis (2011)
  • 著者名/発表者名: Saeed M, Shiina M, Date T, Akazawa D, Watanabe N, Murayama A, Suzuki T, Watanabe H, Hiraga N, Imamura M, Chayama K, Choi Y, Krawczynski K, Liang TJ, Wakita T, Kato T
  • 雑誌名: Hepatology 巻: 54 ページ: 425-433
• [雑誌論文] Endoplasmic Reticulum-associated Degradation (ERAD) Pathway in Degradation of Hepatitis C Virus Envelope Proteins and Production of Virus Particles (2011)
  • 著者名/発表者名: Saeed M., et al
  • 雑誌名: J Biol Chem 巻: 286 ページ: 37264-37273
  • DOI: 10.1074/jbc.M111.259085
  • 査読あり
• [雑誌論文] Production of Infectious Chimeric Hepatitis C Virus Genotype 2b Harboring Minimal Regions of JFH-1 (2011)
  • 著者名/発表者名: Murayama A., et al
  • 雑誌名: J Virol 巻: 86 ページ: 2143-2152
  • DOI: 10.1128/JVI.05386-11
  • 査読あり
• [学会発表] HCV JFH-1株のチンパンジー感染実験で得られた適応変異株の機能解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 加藤孝宣、椎名正明、脇田隆字
  • 学会等名: 第15回日本肝臓学会大会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 2011-10-20